本发明公开了一种HYR‑PB21有效成分血药浓度的定量分析方法,涉及药物分析技术领域,HYR‑PB21有效成分包括布比卡因和双羟萘酸,包括以下步骤:配制HYR‑PB21有效成分标准曲线样品和质控品样品,用混合内标溶液沉淀后,进样检测,建立标准曲线、获得回归方程;将血浆样品采用混合内标溶液沉淀后,进样检测,按回归方程计算布比卡因、双羟萘酸的血药浓度;采用UPLC‑MS/MS法检测;其中,高效液相色谱条件为:色谱柱为Phenomenex Luna Omega C18色谱柱;流动相A为pH=5.7的体积分数为0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈;梯度洗脱。本发明可实现一次分析同时完成两种有效成分的定量检测,检测灵敏度高、准确率高、分析速度快,为HYR‑PB21药物的临床药动学研究提供基础。