本发明涉及一种可重复使用的以纳米金刚石为基质的磷酸化肽吸附材料及其制备和应用。具体是以表面带有氨基的纳米金刚石为基质，3,4,5‑三羟基苯甲醛为修饰剂，采用氨醛缩合反应在金刚石微粒表面引入联苯三酚基团，该基团作为配体可以与锆离子(Zr4+)进行螯合，所得到的材料可以用作固定化金属离子亲和色谱(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)的吸附剂，用来富集复杂生物样品中的磷酸肽。由于Zr4+与联苯三酚之间的螯合作用力大于其与磷酸基团之间的螯合作用力，在富集完成之后，通过使用恰当的碱性洗脱剂，可使磷酸肽从吸附剂上洗脱的同时保留吸附剂上螯合的Zr4+，因此，用酸性溶液重新平衡后，吸附剂可再次进行使用。
本发明涉及一种可重复使用的复合微球的制备方法及磷酸化肽吸附应用。具体是以环氧树脂微球为基质，利用环氧‑胺开环反应将表面带有氨基的纳米金刚石键合在微球表面。因其表面含有氨基，可以与2,3,4‑三羟基苯甲醛发生氨醛缩合反应，将联苯三酚基团引入微球表面，以其作为配体螯合钛离子(Ti4+)，得到可以用作固定化金属离子亲和色谱(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)的复合微球。该材料可以用于复杂样品中磷酸化肽的分离富集，并且可被重复利用。
本发明涉及一种基于固定化金属离子亲和色谱法(immobilized metal affinity chromatography，IMAC)富集实现对血浆中D‑二聚体质谱定量的方法。取D‑二聚体血浆样品，酶解得到血浆蛋白酶解液，使用IMAC富集酶解液中D‑二聚体蛋白特异性的交联肽段，最后使用液相色谱‑质谱联用仪进行鉴定和后续定量。由于D‑二聚体结构中特异性的交联肽段氨基酸序列中含有4个组氨酸，可以和金属离子形成强的配位相互作用，使用该方法可以有效地将其进行富集，从而降低D‑二聚体样品的复杂性，提高其在质谱检测中的灵敏度。该方法可以实现完全不依赖抗体对血浆中D‑二聚体检测定量，具有潜在的临床使用价值。
