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[发明专利]利用地衣芽胞杆菌制备2-α-甘油糖苷的方法及应用-CN202311042774.6在审
发明人：陈守文;尹昊;占杨杨;蔡冬波;李滔 -专利权人：珠海茵智生物技术有限公司
申请日： 2023-08-17 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了利用地衣芽胞杆菌制备2‑α‑甘油糖苷的方法及应用。本发明通过敲除地衣芽胞杆菌中fruR基因构建了重组菌株WX‑02ΔfruR，在此基础上引入来源于肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶表达载体。相比对照菌株，缺失fruR基因可以特异性提高蔗糖磷酸化酶LmSP的酶活水平。利用该重组菌株全细胞催化甘油和蔗糖，相比对照菌株，2‑α‑甘油糖苷的产量显著提高。本发明首次报道利用地衣芽胞杆菌高效生产2‑α‑甘油糖苷，通过敲除fruR极大地提高了蔗糖磷酸化酶的表达，促进了2‑α‑甘油糖苷的合成，显著降低了2‑α‑甘油糖苷生产成本，为2‑α‑甘油糖苷的生产提供了新的思路和方法。
利用地衣杆菌制备甘油糖苷方法应用

[发明专利]ypoP基因在提高地衣芽胞杆菌DW2芳香醇耐受性中的应用-CN202310687427.2在审
发明人：陈守文;占杨杨;王卫民;蔡冬波;李滔;高林 -专利权人：武汉茵智生物技术有限公司
申请日： 2023-06-12 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于工业微生物领域，公开了ypoP基因在提高地衣芽胞杆菌DW2芳香醇耐受性中的应用。本发明通过同源重组的方法对地衣芽胞杆菌DW2中的ypoP基因进行过表达，得到一株对苯乙醇、酪醇和羟基酪醇等芳香醇耐受性显著提高的重组地衣芽胞杆菌DW2‑ypoP。在含有有不同浓度苯乙醇、酪醇和羟基酪醇的基本盐培养基中，重组菌株DW2‑ypoP的生物量明显高于野生型菌株。本发明得到的芳香醇耐受性增强的重组地衣芽胞杆菌对构建生产芳香醇的基因工程菌具有重要的理论和实际意义，具有广泛的应用前景。
ypop 基因提高地衣杆菌 dw2 芳香耐受中的应用

[发明专利]敲除sigW基因在提高地衣芽胞杆菌生产Protein A蛋白中的应用-CN202211011563.1在审
发明人：陈守文;占杨杨;蔡冬波;谢晓梅;许海霞;王冬;李滔 -专利权人：武汉茵智生物技术有限公司
申请日： 2022-08-19 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了敲除sigW基因在提高地衣芽胞杆菌生产Protein A蛋白中的应用。本发明通过敲除地衣芽胞杆菌BL10中sigW基因构建了重组菌株BL10ΔsigW，在此基础上引入来源于金黄色葡萄球菌重组蛋白Protein A表达载体。相比对照菌株，缺失sigW基因可以特异性提高了重组Protein A的表达量。本发明的重组Protein A可广泛用于免疫球蛋白亲和层析技术中。本本发明首次使用芽胞杆菌表达重组Protein A，无细菌内毒素产生，敲除sigW极大地提高了Protein A的产量，显著降低生产成本，为Protein A的生产提供了新的思路和方法。
sigw 基因提高地衣杆菌生产 protein 蛋白中的应用

[发明专利]一种高效合成羟基酪醇的地衣芽胞杆菌、构建方法及应用-CN202210595170.3有效
发明人：陈守文;周飞;占杨杨;许海霞;尹昊;蔡冬波;马昕 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-05-28 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于微生物基因工程技术领域，具体涉及一种高效合成羟基酪醇的地衣芽胞杆菌、构建方法及其应用。本发明首先在地衣芽胞杆菌DW2基础上进一步进行多种改造，获得重组地衣芽胞杆菌DH7；选择来源于大肠杆菌中的4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶和乳酸乳球菌的酮酸脱羧酶，将其转入到地衣芽胞杆菌DH7底盘细胞中，实现了羟基酪醇产量的从头合成；通过组合表达4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶HpaBC和酮酸脱羧酶KivD突变体，使得所述重组地衣芽胞杆菌利用葡萄糖等廉价碳源可以高效合成羟基酪醇，产量高达5.55±0.37。本发明公开的重组地衣芽胞杆菌可以解决羟基酪醇产量低，价格昂贵的问题，具有广阔的工业前景。
一种高效合成羟基地衣杆菌构建方法应用

[发明专利]一株发酵法生产酪醇的地衣芽胞杆菌、及其构建方法和应用-CN202210498491.1有效
发明人：陈守文;占杨杨;周飞;尹昊;许海霞;蔡冬波;马昕 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-05-09 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明本发明属于微生物基因工程技术领域，具体涉及一株发酵法生产酪醇的地衣芽胞杆菌、及其构建方法和应用。申请人在地衣芽胞杆菌中引入来源乳酸乳球菌的酮酸脱羧酶基因；在此基础上缺失丙酮酸激酶基因，酪氨酸/苯丙氨酸转氨酶基因、醛脱氢酶基因；进一步敲除醇脱氢酶基因；再整合表达来源于大肠杆菌的预苯酸脱氢酶基因tyrAfbr，最后以PbacA启动子置换莽草酸途径中莽草酸激酶基因aroK和3‑脱氧‑δ‑阿拉伯糖庚酮糖‑7‑磷酸合成酶基因aroA启动子，获得酪醇生产能力大幅度提高的重组地衣芽胞杆菌。本发明所构建的大肠杆菌基因工程菌利用葡萄糖或甘油等廉价原料可生产10 g/L的酪醇，具有良好的产业化前景。
发酵生产地衣杆菌及其构建方法应用

[发明专利]缺失xpt基因的地衣芽孢杆菌在异源蛋白生产中的应用-CN202111182362.3有效
发明人：马昕;李祎;陈守文;周梦林;占杨杨;蔡冬波 -专利权人：湖北大学
申请日： 2021-10-11 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N9/54 文献下载
摘要：本发明属于细菌基因工程改造和蛋白高效表达领域，公开了缺失xpt基因的地衣芽孢杆菌在异源蛋白生产中的应用。本发明通过基因工程的方法敲除了地衣芽孢杆菌WX‑02中应激蛋白基因xpt，成功得到了缺失基因xpt的地衣芽孢杆菌WX‑02Δxpt，在此基础上转入绿色荧光蛋白游离表达质粒pHY‑GFP、红色荧光蛋白游离表达质粒pHY‑RFP、碱性蛋白酶游离表达质粒pHY‑AprE、角蛋白酶游离表达质粒pHY‑Ker。相对于对照菌株，本发明所构建得到的工程菌株在上述蛋白表达量提升方面效果显著，为地衣芽孢杆菌异源蛋白生产提供新思路。
缺失 xpt 基因地衣芽孢杆菌蛋白生产中的应用

[发明专利]来自于玫瑰的糖基转移酶RrUGT3在生物合成天麻素中的应用-CN202210409803.7有效
发明人：陈守文;占杨杨;李乐怡;李智;许海霞;蔡冬波 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-04-19 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体公开了来自于玫瑰的糖基转移酶RrUGT3在生物合成天麻素中的应用，所述的糖基转移酶RrUGT3的序列为SEQ ID NO.2所示。将编码SEQ ID NO.2的基因转入地衣芽胞杆菌中，在发酵培养基中添加对羟基苯甲醇进行发酵，即可获得生物发酵的天麻素，能高效且专一性转化对羟基苯甲醇合成天麻素，为微生物转化法工业化生产天麻素奠定基础。
来自于玫瑰糖基转移酶 rrugt3 生物合成天麻中的应用

[发明专利]糖基转移酶突变体及其在发酵生产芳香醇糖苷中的应用-CN202210490385.9有效
发明人：陈守文;李智;占杨杨;赵晶;蔡冬波;王冬 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-05-05 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及糖基转移酶突变体及其在发酵生产芳香醇糖苷中的应用，所述突变体的氨基酸为SEQ ID NO.1所示。相比野生型，突变体T9(A13W/I67F/A80W)或者表达其的微生物可催化酪醇，对羟基苯甲醇通过糖基转移反应来制备高纯度的芳香醇糖苷，区域选择性大于90％，因此本发明提供的突变体在芳香醇糖苷的合成方面具有应用价值，可减少分离纯化目标产物的成本。
糖基转移酶突变体及其发酵生产芳香糖苷中的应用

[发明专利]一种促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法-CN201910334193.7有效
发明人：陈守文;李鑫;周梦林;占杨杨;郑新驰;钟良邦;杨欢;陈建刚 -专利权人：武汉骏安生物科技有限公司
申请日： 2019-04-24 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12P13/02 文献下载
摘要：本发明涉及发酵工程领域，具体涉及一种通过控制亚硝酸盐积累来促进地衣芽胞杆菌高产聚谷氨酸钠的方法。该方法以地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)为出发菌株，通过菌种活化和种子培养，将菌种接入发酵培养基中，初始培养基中不含有硝酸钠，而是在发酵过程中，采用恒速流加和pH反馈流加的方式补加硝酸钠溶液，从而避免发酵过程中亚硝酸盐的积累，确保地衣芽胞杆菌正常代谢(粗)甘油，促进聚谷氨酸钠合成。本发明的方法采用(粗)甘油为发酵原料，并使用硝酸钠部分替代谷氨酸，降低了发酵成本，同时也为微生物代谢硝酸盐产生亚硝酸盐的发酵问题提供一种新的解决策略。
一种促进地衣杆菌高产谷氨酸方法

[发明专利]一种提高芽胞杆菌甘油代谢增加聚γ-谷氨酸产量的方法-CN201810396812.0有效
发明人：陈守文;许勇;占杨杨;王欢;石姣;周梦林;马昕;李鑫 -专利权人：湖北大学
申请日： 2018-04-28 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12P13/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过强化黄素腺嘌呤二核苷酸的合成提高芽胞杆菌甘油代谢增加聚γ‑谷氨酸产量的方法。通过在芽胞杆菌中强化表达黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)合成途径中的三个关键基因ribE、ribF和ribH，分别构建了三株FAD强化合成的菌株。在不同的液体发酵条件下，ribE、ribF和ribH过表达使甘油代谢能力比对照菌株分别至少提高了22.02％，20.62％和23.92％，这些重组菌株的聚γ‑谷氨酸产量至少是对照菌株的1.20倍，1.18倍和1.27倍。由此表明，强化FAD合成可显著提高芽胞杆菌甘油代谢，增加聚γ‑谷氨酸合成。该方法能够提高甘油利用来增强目标产物的合成，在利用甘油为原料微生物发酵合成生物基化合物方面具有广泛的应用价值，为微生物高效利用甘油合成生物基化学品提供了一种新策略。
一种提高杆菌甘油代谢增加谷氨酸产量方法

[发明专利]芽胞杆菌rex基因在提高聚γ-谷氨酸产量中的应用-CN201910685440.8有效
发明人：陈守文;占杨杨;周梦林;马昕;李鑫 -专利权人：湖北大学
申请日： 2019-07-27 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12P13/02 文献下载
摘要：本发明属于基因工程和微生物技术领域，具体芽胞杆菌rex基因在提高聚γ‑谷氨酸产量中的应用。本方法采用分子生物学技术，通过在地衣芽胞杆菌中敲除转录抑制因子基因rex，获得了rex缺失的地衣芽胞杆菌工程菌株WX‑02△rex，显著提高了地衣芽胞杆菌甘油代谢的速率。WX‑02△rex在不同培养基中的甘油消耗速率比原始菌地衣芽胞杆菌WX‑02至少提高了10.55%，最高可达27.94%。利用该菌株在聚γ‑谷氨酸发酵培养基中能够显著提高聚γ‑谷氨酸的产量，至少提高了35.29%，最高可达50%。说明该基因工程改造方法在提高微生物甘油代谢速率具有重要作用，并提高甘油合成生物基化学品的效率。
杆菌 rex 基因提高谷氨酸产量中的应用

[发明专利]缺失亮氨酸脱氢酶基因的地衣芽胞杆菌在异源蛋白生产中的应用-CN201911295735.0有效
发明人：陈守文;蔡冬波;莫非;许勇;占杨杨;熊敏;马昕;吴晗嘉;饶忆 -专利权人：湖北大学
申请日： 2019-12-16 - 公布日： 2022-08-30 - 主分类号： C12N9/54 文献下载
摘要：本发明涉及地衣芽胞杆菌基因工程改造和蛋白高效表达领域，公开了缺失bcd基因的地衣芽胞杆菌在蛋白生产中的应用，本发明通过基因工程的方法敲除了地衣芽胞杆菌WX‑02中亮氨酸脱氢酶基因bcd，成功得到了缺失基因bcd的地衣芽胞杆菌WX‑02Δbcd，在此基础上转入碱性蛋白酶AprE游离表达质粒pHY‑AprE、角蛋白酶游离表达载体pHY‑Ker、中性蛋白酶游离表达载体pHY‑NprE。相对于对照菌株，本发明所构建得到的工程菌株在上述蛋白酶酶活提升方面效果显著，酶活均提高了23%以上。
缺失亮氨酸脱氢酶基因地衣杆菌蛋白生产中的应用

[发明专利]苯丙酮酸脱羧酶突变体F542W在生物发酵生产苯乙醇中的应用-CN201910688020.5有效
发明人：陈守文;占杨杨;王欢;许勇;马昕 -专利权人：湖北大学
申请日： 2019-07-29 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： C12P7/22 文献下载
摘要：本发明属于基因工程和酶工程技术领域，公开了苯丙酮酸脱羧酶突变体F542W在生物发酵生产苯乙醇中的应用。本发明通过定点突变的方式，将来源于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis subsp.Lactis,其保藏号为CICC6246)的苯丙酮酸脱羧酶KivD分子催化结构域附近的第542位苯丙氨酸突变为色氨酸显著提高了苯丙酮酸脱羧酶的酶活力，解决了目前苯丙酮酸脱羧酶对苯丙酮酸催化效率不高的问题，应用于苯乙醇的生物发酵，为苯乙醇的生产提供新思路，适合大规模推广。
丙酮酸脱羧酶突变体 f542w 生物发酵生产乙醇中的应用

[发明专利]一种含有苯丙酮酸脱羧酶突变体的全细胞催化剂及在生产苯乙醇中的应用-CN201910705699.4有效
发明人：陈守文;占杨杨;王欢;石姣;周梦林;马昕 -专利权人：湖北大学
申请日： 2019-08-01 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种含有苯丙酮酸脱羧酶突变体的全细胞催化剂及在生产苯乙醇中的应用。本发明是以苯乙醇耐受菌地衣芽孢杆菌作为表达宿主，通过游离质粒pHY300PLK异源表达来源于乳酸乳球菌的苯丙酮酸脱羧酶突变体和来源于地衣芽孢杆菌自身的醇脱氢酶，得到了苯丙酮酸脱羧酶、醇脱氢酶共表达的重组地衣芽孢杆菌。以L‑苯丙氨酸为底物，通过重组菌全细胞催化生产苯乙醇。具有低生产成本、生产条件温和、转化体系中杂质较少、工艺步骤简单、生产操作安全等优点。
一种含有丙酮酸脱羧酶突变体细胞催化剂生产乙醇中的应用

[发明专利]一种高效代谢甘油的芽胞杆菌的制备方法和应用-CN201810420776.7有效
发明人：陈守文;占杨杨;王欢;周梦林;许勇;石姣;马昕;李鑫 -专利权人：湖北大学
申请日： 2018-05-04 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于基因工程和微生物技术领域，具体涉及一种高效代谢甘油的芽胞杆菌的制备方法和应用。本方法采用分子生物学技术，通过在地衣芽胞杆菌中敲除转录抑制因子基因ccpC，获得了ccpC缺失的地衣芽胞杆菌工程菌株WX‑02△ccpC，显著提高了地衣芽胞杆菌甘油代谢的速率。WX‑02△ccpC在不同培养基中的甘油消耗速率比原始菌地衣芽胞杆菌WX‑02至少提高了18.38%，最高可达32.67%。利用该菌株在聚γ‑谷氨酸发酵培养基中能够显著提高聚γ‑谷氨酸的产量，至少提高了10.7%，最高可达17.4%。说明该基因工程改造方法在提高微生物甘油代谢速率具有重要作用，并提高甘油合成生物基化学品的效率。
一种高效代谢甘油杆菌制备方法应用

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