本发明公开了一种抗蓝耳病Marc‑145细胞系及其制备方法和应用。所述抗蓝耳病毒Marc‑145细胞系是将Marc‑145细胞系的CD163胞外域SRCR5敲除所得到。本发明还提供了一对剪切Marc‑145细胞CD163受体SRCR5的gRNA,序列分别如SEQ ID NO.2~3所示。本发明将Marc‑145细胞表面CD163受体胞外第5个结构域SRCR5经CRISPR/CAS9基因编辑技术删除后,所得抗蓝耳病Marc‑145细胞系能够完全抵抗PRRSV感染,包括抗高致病性毒株HP‑PRRSV。而且,该抗蓝耳病Marc‑145细胞系表面CD163受体表达正常,其他生物学功能正常。本发明的抗蓝耳病Marc‑145细胞系对研究PRRSV致病机理及挖掘新型抗病或易感基因具有重要意义,为PRRSV研究提供了一个新的模型,对PRRSV抗性猪的筛选和培育具有重要的指导意义。