本发明提供的耐热葡萄糖淀粉酶是如下(a)或(b)的蛋白质:(a)具有SEQ ID NO.22所示氨基酸序列;(b)具有与SEQ ID NO.22所示氨基酸序列至少70%同源性的序列。本发明提供的编码基因是如下(1)-(3)的脱氧核糖核苷酸:(1)具有SEQ ID NO.20的所示核苷酸序列;(2)具有SEQ ID NO.21所示核苷酸序列;(3)具有与(1)或(2)所示核苷酸序列至少70%同源性的序列。本发明提供的重组宿主细胞包括具有上述编码基因的重组表达载体。根据本发明的葡萄糖淀粉酶最适温度高于70℃,热稳定性好,适于工业上应用的要求。本发明提供的重组宿主细胞适于上述葡萄糖淀粉酶基因的表达,通过摇瓶诱导表达,其中KM71蛋白表达量达到0.7g/L,具有产业化应用前景。
本发明提供了一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法,以及一种由该重组毕赤酵母菌株制备的混合酶制剂。所述重组毕赤酵母菌株同时含有来自微小毛霉菌的葡萄糖淀粉酶基因和α-淀粉酶基因,其基因序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。由该重组菌株制备的混合酶制剂,糖化酶活力相对仅携带葡萄糖淀粉酶基因的菌株提高了79%,淀粉液化酶活力相对仅携带α-淀粉酶基因的菌株提高了183%。两种酶的最适作用温度和最适作用pH均相近,在淀粉水解过程中具有协同促进作用,因而具有较大的应用潜力和优势。