本发明公开了一种通过DNA合成改组组合突变获得的ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的野生型ω‑转氨酶进行点突变而得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：F115L‑H210N。本发明通过DNA合成改组组合突变方法，将前期所得到的正向突变随机组合，通过实验验证，该方法可有效地提高正突变概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性明显优于野生酶的突变酶。
本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω‑转氨酶突变所得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：E133Q、D224K、D231A、E253A或D268K中的至少一种。本发明筛选得到的ω‑转氨酶突变体在热力学稳定性、酶活性方面明显优于野生酶。
本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的ω‑转氨酶突变所得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：E133Q、D224K、D231A、E253A或D268K中的至少一种。本发明筛选得到的ω‑转氨酶突变体在热力学稳定性、酶活性方面明显优于野生酶。
本发明公开了一种ω‑转氨酶突变体、基因及应用。野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ω‑转氨酶突变体为以下一种：(1)L118T/F115L双突变的突变体；(2)L118T/F115L/E133A三突变的突变体；(3)L118T/F115L/E133K三突变的突变体；(4)L118T/F115L/E253A三突变的突变体。本发明基于技术成熟的遗传算法，以及TK‑SA模型算法，在此基础上改进得到ETSS算法，结合ω‑转氨酶表面电荷‑电荷相互作用，确定需要突变的氨基酸残基位点，通过定点突变技术进行实验验证，该方法可有效地提高正突变概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性、酶活性明显优于野生酶的突变酶。
本发明公开了一种通过DNA合成改组组合突变获得的ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的野生型ω‑转氨酶进行点突变而得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为：H210N‑N245D‑E253A‑G292D。本发明通过DNA合成改组组合突变方法，将前期所得到的正向突变随机组合，通过实验验证，该方法可有效地提高正突变概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性明显优于野生酶的突变酶。
本发明公开了一种通过DNA合成改组组合突变获得的ω‑转氨酶突变体，由来自土曲霉(Aspergillus terreus)的野生型ω‑转氨酶进行点突变而得，野生型ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述ω‑转氨酶突变体的突变位点为以下任意一种：(1)F115L‑H210N‑M150C‑M280C；(2)F115L‑H210N；(3)F115L‑H210N‑E253A‑I295V；(4)I77L‑F115L‑E133A‑H210N‑N245D；(5)I77L‑Q97E‑F115L‑L118T‑E253A‑G292D；(6)I77L‑E133A‑N245D‑G292D；(7)H210N‑N245D‑E253A‑G292D。本发明通过DNA合成改组组合突变方法，将前期所得到的正向突变随机组合，通过实验验证，该方法可有效地提高正突变概率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学稳定性明显优于野生酶的突变酶。
本申请公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体的应用，所述(R)‑ω‑转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示以2,3‑二氯苯乙酮或2,5‑二氯苯乙酮为底物、所述(R)‑ω‑转氨酶突变体为催化剂，存在氨基供体的条件下，进行催化反应，合成(R)‑2,3‑二氯苯乙胺或(R)‑2,5‑二氯苯乙胺。该方法以(R)‑ω‑转氨酶作为生物催化剂，对底物2,3‑二氯苯乙酮或2,5‑二氯苯乙酮进行催化生成，产物可作为药物中间体来合成相关药物。本申请立体选择性强，制备过程简单且提取方便，解决目前手性化合物合成广泛存在的光学纯度低、产率低和污染环境等问题。
