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- [发明专利]一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法-CN201610715466.9在审
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杨美宁
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杨美宁
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2016-08-25
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2018-03-09
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C12N15/54
- 一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法,用DNA重组技术将单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV1tk)定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN,并用限制性内切酶进行酶切及测序鉴定;用PolyFect Transfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67,通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将病毒感染人胃癌细胞,检测HSV1tk自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应。经酶切鉴定和DNA序列测定,HSV1tk基因成功定向插入到pLXSN载体中;重组病毒DNA转染包装细胞,筛选出对G418具稳定抗性的克隆PT67/tk,扩大培养,获取病毒滴度为4×104cfu/mL的重组逆转录病毒培养液丙氧鸟苷(GCV)对SGC7901/tk有明显杀伤作用,对SGC7901无明显毒性,证明该病毒表达HSV1tk基因具有生物活性。
- 一种逆转录病毒载体hsv1方法
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