本发明设计KASP标记引物组包括用于检测BnALS1基因和BnALS3基因突变位点的特异性引物和通用引物,BnALS1和BnALS3基因共用一对特异性引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,BnALS1基因的通用引物如SEQ ID NO.3所示,BnALS3基因的通用引物如SEQ ID NO.4所示。本发明设计的KASP引物组能特异性区分和检测BnALS1和BnALS3基因的突变位点G或T,检测株系的除草剂抗性。本发明设计的KASP检测方法准确可靠,操作方便,适用于BnALS1和BnALS3基因抗性位点的鉴定及辅助选择育种。
本发明所述抗磺酰脲类除草剂油菜基因包括BnALS1m1、BnALS1m2、BnALS3m1和BnALS3m2中的一种或多种;所述BnALS1m1、BnALS1m2、BnALS3m1和BnALS3m2的核苷酸分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
本发明公开了检测甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂基因BnALS3R的引物与应用,属于分子育种领域。引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2用于检测甘蓝型油菜抗磺酰脲类除草剂基因BnALS3R的方法为:以甘蓝型油菜总DNA作为模板,加入引物进行PCR扩增;PCR产物进行限制性核酸内切酶BsrDI消化;酶切产物用来区分含抗性基因BnALS3R的纯合型油菜、含抗性基因BnALS3R的杂合型油菜和不含抗性基因BnALS3R的纯合型油菜。本发明能快速、准确地检测油菜植株是否含有抗性基因BnALS3R,更精确检测所含除草剂基因是纯合型还是杂合型,从而快速有效地实现培育抗除草剂油菜新品种的育种目标。