本发明提供了一种识别CD276‑CAR分子的纳米抗体及其应用,所述纳米抗体的可变区包括如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:12所示的CDR3。本发明所述识别CD276‑CAR分子的纳米抗体能够特异性识别CD276‑CAR‑T细胞上CD276‑CAR分子,与其他分子无交叉反应;所述识别CD276‑CAR分子的纳米抗体与CD276‑CAR分子的结合活性高,且采用所述纳米抗体对CD276‑CAR‑T细胞CAR转染阳性率检测的流式分析方法进行了开发和全面方法学验证,所述纳米抗体能准确、特异、灵敏地检测CD276‑CAR分子的转染效率,具有重要的应用价值。