一种唾液酸酶的制备方法,包括如下步骤:制备唾液酸酶基因片段;将唾液酸酶基因片段克隆到pMD‑18T中,得到连接产物,将连接产物转化E.coliJM109,挑选阳性克隆子测序,获得如SEQ ID NO:1所示的基因序列;将阳性克隆子和原核表达载体连接,得到重组表达载体;将重组表达载体转化得到重组工程菌;对重组工程菌进行发酵诱导表达、纯化,得到唾液酸酶。
本发明涉及菠萝中性转化酶基因Ac-NI1,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1,一种菠萝中性转化酶基因Ac-NI1编码的蛋白质,其氨基酸序列如SEQ ID NO:2,同时,本发明还涉及菠萝中性转化酶基因克隆方法:采用改良SDS法提取菠萝果实中的总RNA,RNA含量及质量采用琼脂糖凝胶电泳检测;以获得的总RNA为模板,进行反转录获得cDNA;用第一链反转录产物10μl作为PCR的模板,扩增PCR,转化,筛选阳性克隆,经PCR进一步验证后测序,获得Ac-NI1基因;筛选的阳性克隆经PCR进一步验证后测序,获得Ac-NI1基因;菠萝果实中性转化酶基因的大量表达,有利于果糖和葡萄糖的积累,改变了果实中糖分的组成和比例,