本发明公开了一种用于蚋类昆虫(黑蝇)分类和鉴定的引物及其制备方法和应用,引物序列SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2;引物片段370bp;引物cytb组合来自于Chris Simon1994。本发明的引物cytb组合来自于Chris Simon1994,上下游为自己组合,在现有技术中引物未被使用也未被应用于蚋类昆虫(黑蝇)分类中去,未见相关蚋类昆虫(黑蝇)国内外鉴定文章使用过此引物;本发明的引物片段约370bp,易扩增,在不同种间的表现良好,相较其他引物,对于种下分化的表现要优异一些;比已经应用于蚋类昆虫(黑蝇)的其他cytb引物比要适用范围更广。