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[发明专利]一种多亚基蛋白的复性方法-CN200810124598.X无效
发明人：张建琼;孟凡岩;谢维;沈传来 -专利权人：东南大学
申请日： 2008-08-26 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C07K1/22 文献下载
摘要：一种多亚基蛋白的复性方法，其特征在于对两个或两个以上亚基组成的蛋白，其中一个或多个蛋白亚基先行预复性，其它的一个或多个蛋白亚基结合在色谱柱上，梯度增加含预复性蛋白亚基的复性液使结合在色谱柱上的蛋白亚基复性并与预复性的蛋白亚基结合而形成完整的蛋白质分子，经过洗涤后将复性后的蛋白从色谱柱上洗脱下来。应用此复性方法制备的多个亚基组成的蛋白，蛋白得率高，不需纯化，操作简便，节省原料，省时省力。
一种多亚基蛋白复性方法

[实用新型]一种滴加复性设备-CN201720310832.2有效
发明人：张德宝;李冠英;李海红;刘惠 -专利权人：上海华新生物高技术有限公司
申请日： 2017-03-28 - 公布日： 2017-12-15 - 主分类号： C07K1/00 文献下载
摘要：本实用新型涉及生物技术领域，具体地涉及一种滴加复性设备。所述的滴加复性设备包括通过管路依次连接的加压装置、蛋白溶液存储器和蛋白复性溶液存储器，所述的蛋白复性溶液存储器置于一搅拌装置上，所述的蛋白复性溶液存储器的顶部设有喷雾头，连接蛋白溶液存储器和蛋白复性溶液存储器的管路上设有用于控制蛋白溶液滴加的智能控制开关本实用新型所提供的滴加复性设备适合目前多种常用的复性方法，集成滴加与复性操作于一体化，有利于变性蛋白复性工艺的改进与开发，实现高效的滴加复性。
一种复性设备

[发明专利]一种包涵体蛋白的复性方法及用途-CN202211508289.9在审
发明人：杜新永;刘长太;李纪兆;陈磊;李晓娟 -专利权人：青岛润达生物科技有限公司
申请日： 2022-11-28 - 公布日： 2023-05-30 - 主分类号： C07K1/113 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种包涵体蛋白的复性方法及用途。一种包涵体蛋白的复性方法，包括：将包涵体蛋白溶于NTA Buffer溶液中，超声促进杂蛋白的溶解；用6 M的盐酸胍溶液溶解包涵体蛋白，将溶解的包涵体蛋白用3M的盐酸胍进行2倍体积稀释，逐滴滴入复性液进行复性48 h；利用PEG 20000将复性后的液体进行100倍浓缩即可得到可溶性蛋白。本发明采用蛋白复性的方法将表达量较高的包涵体蛋白进行纯化、溶解和复性，得到纯度较高的可溶性蛋白，能保证抗原的有效性。
一种包涵蛋白复性方法用途

[实用新型]一种大体积蛋白质复性装置-CN202021483206.1有效
发明人：樊敏娣;宋吉慧;陈仁 -专利权人：上海普欣生物技术有限公司
申请日： 2020-07-24 - 公布日： 2021-05-07 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本实用新型涉及蛋白质纯化技术领域，尤其涉及一种大体积蛋白质复性装置，通过于用于盛放复性液的第一容器内设置水泵以用于循环第一容器中的复性液，并将蠕动泵的泵头上的抽液软管的进液端伸入用于盛放待复性蛋白质的第二容器中，出液端伸入第一容器中，从而利用蠕动泵控制待复性的蛋白质滴入复性液的速度，并利用水泵实现第一容器内大体积的复性液的循环，便于大体积复性液的蛋白复性；该装置可以有效的解决生产中试级别的蛋白复性操作，可一次复性大量的样品，比起搅拌式蛋白质复性装置，能有效的节约成本，省时省力，便于实验员操作。
一种体积蛋白质复性装置

[发明专利]一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法-CN202211453847.6在审
发明人：朱克骏;肖文俊;陈京生;王世玲;屈帅杰;来晓东;江秋虹;陶立峰 -专利权人：安徽智飞龙科马生物制药有限公司;重庆智飞生物制品股份有限公司;北京智飞绿竹生物制药有限公司
申请日： 2022-11-18 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组蛋白包涵体复性与纯化的方法，通过在包涵体复性液中添加精氨酸提高复性后蛋白的稳定性，同时，调整稀释复性中的精氨酸浓度、静置时间、浓缩倍数等工艺参数，进一步提升变性包涵体蛋白的复性效果，提高所述方法中变性包涵体蛋白复性得率和最终蛋白得率
一种重组蛋白包涵复性纯化方法

[发明专利]一种核受体蛋白体外液相透析复性的方法-CN202010492246.0在审
发明人：沈萍萍;杨南飞;郑薇;樊继强;王婧悦 -专利权人：南京大学
申请日： 2020-06-02 - 公布日： 2021-12-07 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域的蛋白质复性方法，针对核受体蛋白的结构特性，以锌离子辅助的梯度透析复性方法，实现对全长核受体蛋白的完全复性，恢复其生物学活性。本发明根据核受体蛋白复性过程中的不同状态，优化透析复性液的组分梯度，使得在不同的复性阶段，以较合适的盐离子强度，稳定剂及中间态抑制剂浓度帮助核受体蛋白进行折叠。此外，针对核受体蛋白DNA结合区(DNA binding domain，DBD)高疏水性的结构特点，引入10μM的硫酸锌，帮助复性过程中DBD区域形成正确的锌指结构，减小因热力学不稳定而导致的蛋白质折叠失败相比以往的针对核受体蛋白的复性方法，该种方法可实现全长蛋白质(非蛋白截短体)的完全复性，操作方法简单，得率可达30％以上。复性获得的核受体蛋白具备天然活性，可用于后续生物学功能分析及结构生物学相关应用。
一种受体蛋白体外透析复性方法

[发明专利]一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法-CN201910237696.2有效
发明人：雍金贵;张伦 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2019-03-27 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法，采用温和的变性方法溶解包涵体蛋白，保护包涵体蛋白中原有的二级结构不被破坏将大大有利于包涵体蛋白的复性；该方法集合了稀释及透析进行蛋白复性的方法，第一次稀释降低变性剂浓度，促进蛋白复性，第二次稀释降低添加剂浓度，使蛋白更容易适应基础缓冲液的环境，最后进行透析去除各种添加剂，可以得到复性效率高，浓度高的复性后蛋白。
一种包涵蛋白稀释透析复性方法

[发明专利]一种结核分枝杆菌包涵体蛋白复性的方法及其专用复性缓冲液-CN202210035625.6在审
发明人：阳幼荣;吴雪琼;梁艳;薛勇;贾再兴;张俊仙 -专利权人：中国人民解放军总医院第八医学中心
申请日： 2022-01-13 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C07K14/35 文献下载
摘要：本发明公开了一种结核分枝杆菌包涵体蛋白复性的方法及其专用复性缓冲液。实验证明，采用本发明提供的复性缓冲液可以复性结核分枝杆菌蛋白W544蛋白，复性得到的W544蛋白能有效刺激结核分枝杆菌感染小鼠的脾淋巴细胞产生免疫反应，同时不刺激健康小鼠的脾淋巴细胞产生免疫反应。由此可见，复性的W544蛋白具有很好的免疫原性。本发明提供的复性缓冲液及依据其建立的结核分枝杆菌包涵体蛋白复性方法具有重要的应用价值。
一种结核分枝杆菌包涵蛋白复性方法及其专用缓冲液

[发明专利]一种蛋白包涵体及重组人β-神经生长因子的制备方法-CN201910390559.2有效
发明人：李树刚;张伟;王传胜;邓永康;龚会英;柴新娟;但国平;程丹凝;余英鹏 -专利权人：重庆科润生物医药研发有限公司
申请日： 2019-05-10 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12P21/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种蛋白包涵体及重组人β‑神经生长因子的制备方法，对含肠激酶酶切位点的重组人β‑神经生长因子前体蛋白的包涵体进行色谱复性，得到复性前体蛋白，即蛋白包涵体；对复性前体蛋白进行肠激酶酶切，得到酶解产物本发明将色谱法应用到rhpro‑NGF包涵体复性中，相比于传统的稀释复性方法，显著提高复性率，缩短复性时间，使后续纯化更简单，获得结构正确高纯度产品，能够减少蛋白质互相聚集的机会，打破复性变性反应平衡，使复性反应持续进行，以较高的蛋白复性浓度进行，便于去除变性剂，集成复性与纯化过程，可以实现自动化、规模化，层析介质可以重复使用，降低工艺成本，更利于将来产业化的大规模生产。
一种蛋白包涵重组神经生长因子制备方法

[发明专利]可独立用于蛋白质复性或作为蛋白质复性前导操作的循环运作方法-CN201510450732.5有效
发明人：张鹏 -专利权人：张鹏
申请日： 2015-07-28 - 公布日： 2020-12-25 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了可独立用于蛋白质复性或作为蛋白质复性前导操作的循环运作方法，包括：(1)将待复性样本加入到变性溶液中溶解；(2)低温环境，变性剂从溶液中逐步析出，微观层面首次做到分子程度产生变性盐浓度平滑下降梯度，在溶液中逐渐形成复性和/或准复性态蛋白质前体，同时随着变性剂的结晶析出，溶液体积减小，蛋白质浓度获得大幅度提升；(3)分离复性和/或准复性态蛋白质前体；(4)将步骤(2)析出的变性剂的结晶与步骤(3)分离出的复性蛋白质和/或准复性蛋白质前体的溶液再溶解，回到步骤(1)的状态，完成一个生产循环。该方法可高效制备复性和/或准复性态蛋白质前体。
独立用于蛋白质复性作为前导操作循环运作方法

[发明专利]分离变性蛋白/包涵体蛋白复性混合液中蛋白聚集体的方法-CN01142300.5有效
发明人：苏志国;李明 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2001-09-27 - 公布日： 2003-04-16 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明涉及的分离变性蛋白/包涵体蛋白复性混合液中蛋白聚集体方法，其特征在于，在蛋白复性工艺过程中，变性的复性蛋白溶液中含有不同状态的蛋白，将含有不同状态的蛋白的复性蛋白溶液利用凝胶过滤层析技术进行凝胶过滤层析分离，并在每升凝胶过滤层析的复性的缓冲液中加入1～3mol的变性剂和0.1～0.5mol的盐离子；所述的变性剂为脲、盐酸胍、Triton或SDS；所述的盐离子来自含有Na+、K+或NH4+离子的盐酸盐、醋酸盐、碳酸盐、磷酸盐或硫酸盐；其操作简单，可有效的分离复性蛋白中的各种形式的成分，提高单一的复性蛋白纯度。
分离变性蛋白包涵复性混合液聚集体方法

[发明专利]一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法-CN201610153001.9有效
发明人：冷春生;李一奎;魏宏壮;常晓慧 -专利权人：通化东宝药业股份有限公司
申请日： 2016-03-17 - 公布日： 2017-08-25 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，属于蛋白纯化领域，包括以下步骤1)破碎表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌菌体，收集包涵体；2)洗涤包涵体，然后使包涵体溶解、融合蛋白变性；3)蛋白复性步骤；本方法不需预先的蛋白纯化步骤，直接进行蛋白复性，最后收获高浓度的具有天然结构的重组胰岛素原融合蛋白，克服现有技术中，蛋白复性后蛋白浓度低，易发生蛋白聚集沉淀的缺陷，复性率提高至80％‑90％，提高生产效率
一种重组胰岛素融合蛋白复性方法

[发明专利]一种重组蛋白的复性方法-CN201910733287.1在审
发明人：李娜;王成林;吴召慧;吴飞;孙莹莹;苏晓烽;何为无 -专利权人：无锡傲锐东源生物科技有限公司
申请日： 2019-08-09 - 公布日： 2021-02-09 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：大肠杆菌在高效表达外源蛋白时，通常形成不可溶、不具备生物活性的包涵体。包涵体经过变性溶解、复性后才能得到具有生物活性的蛋白。变性蛋白的再折叠是一个复杂的过程，每种蛋白的复性也会有不同，影响因素也较多。本发明制定一系列缓冲体系，组合相对可控制因素，同时对一种变性蛋白进行复性，经过复性蛋白的鉴定确定最适用该蛋白的一种复性缓冲溶液。本发明制定的一系列缓冲体系，囊括酸碱性、氧化还原剂、二价阳离子等可控制因素，可在较大范围内适用于多种变性蛋白的复性条件筛选，最终确定该复方法中包含32种复性Buffer。利用孔板实验，将微量蛋白进行实验，筛选最佳复性缓冲液。
一种重组蛋白复性方法

[发明专利]包涵体蛋白的复性方法-CN202310122826.4在审
发明人：修朝阳;张强;陈英华;高强;郑保富 -专利权人：合肥欧创基因生物科技有限公司
申请日： 2023-02-16 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C07K1/16 文献下载
摘要：本发明公开了包涵体蛋白的复性方法，涉及生物医药技术领域。本发明包括如下步骤：S1：获取包涵体，包涵体洗涤、溶解、过滤，获得含有包涵体蛋白的变性液；S2：蛋白纯化；S3：蛋白浓缩；S4：透析；S5：分子筛柱对透析液洗脱纯化，得到复性蛋白。解决现有的包涵体复性方法操作繁琐，易形成无活性聚集体的问题。本发明公开的复性方法针对二硫键小于等于2个的蛋白进行复性，具有复性效率高、适用于大多数的包涵体蛋白的优点。
包涵蛋白复性方法

[发明专利]一种VP1蛋白及其制备方法和应用-CN202111086545.5在审
发明人：吴洪流;胡广;张明;郭蕾;陈国 -专利权人：北京凯悦宁医药科技有限公司
申请日： 2021-09-16 - 公布日： 2021-12-10 - 主分类号： C07K14/085 文献下载
摘要：本发明公开了一种VP1蛋白及其制备方法和应用。一种VP1蛋白的制备方法，将诱导表达的VP1包涵体蛋白经过洗涤、尿素溶解、变性纯化、复性得到VP1蛋白；其中，所述的复性采用涡流复性装置进行涡流复性。本发明选择了大肠杆菌表达的不带有任何多余序列的VP1蛋白作为抗原，用涡流装置对表达的蛋白进行了复性，蛋白在涡流复性装置中均一剪切力的作用下构象变的规则，使其更加接近于天然的蛋白，得到的抗原蛋白相关检测指标都符合人用疫苗标准，复性的蛋白和铝佐剂混合免疫小鼠后在体内产生了很好的免疫原性反应，得到的血清具有较高的中和效价，这为EV71或CA16亚单位疫苗的研制奠定了基础。
一种 vp1 蛋白及其制备方法应用

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