本发明公开了一种腈水解活性专一性提高的腈水解酶突变体及其应用,所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第200位、第224位、第229位、第246位进行单突变或多突变获得的。本发明构建的突变体C145N、K200R/R224W/A229P、K200R/R224W/N246V催化苯乙腈产生的主产物为苯乙酸,分别占产物含量的96.5%、96.3%和98.8%,腈水合活性比K200R/R224W分别下降88.3%、82.2%和94.3%,有利于定向生成目的产物苯乙酸。对腈水解酶的反应专一性调控使其能够应用于酰胺和羧酸的绿色工业催化合成,具有重要意义。