本发明公开了一种用于检测马流产沙门氏菌抗体的间接ELISA试剂盒及其制备方法和应用。所述的试剂盒中包含马流产沙门氏菌FljB蛋白包被的酶标板,其中,所述的马流产沙门氏菌FljB蛋白由SEQ ID NO.2所示的序列编码。本发明通过序列分析后,以P3/P4扩增马流产沙门氏菌特异性序列,并将其克隆至原核表达载体pET‑28a,构建重组表达质粒pET28a‑FljB,转化入Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,以纯化后的FljB蛋白作为包被抗原,建立马流产沙门氏菌抗体的间接ELISA方法,结果显示,以该蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性,可以用于临床马流产沙门氏菌抗体的检测。