本发明公开了一种磺酰脲类除草剂水解酶TsmE突变体、其编码基因及用途。一种磺酰脲类除草剂水解酶TsmE突变体,氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。编码本发明所述突变体的基因。本发明所述的突变体在降解磺酰脲类除草剂中的应用。本发明以野生型TsmE为出发模板,通过定向进化技术,获得了酶活显著提升的突变体M7(S179A)。与野生型相比,突变体M7对甲磺隆、甲嘧磺隆、苯磺隆、苄嘧磺隆、胺苯磺隆和氯嘧磺隆的比酶活分别提高了1.7、1.6、2.5、1.3、1.4和1.2倍。所述突变体及其编码基因可用于构建抗磺酰脲类除草剂转基因作物,也可用于土壤、水体中磺酰脲类除草剂的去除,具有非常重要的理论和应用价值。