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[发明专利]高感受态大肠杆菌菌株的驯化筛选方法-CN201410380004.7在审
发明人：任军;高芳芳 -专利权人：北京康为世纪生物科技有限公司
申请日： 2014-08-04 - 公布日： 2014-12-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高感受态大肠杆菌菌株的驯化筛选方法，包括：将携带有耐药基因和负筛选基因的驯化质粒转入感受态大肠杆菌细胞中；利用耐药基因分离出感受性相对较高的大肠杆菌，然后使个别的所述感受性相对较高的大肠杆菌将驯化质粒丢失，再利用负筛选基因分离出将驯化质粒丢失的大肠杆菌；使用所述驯化质粒循环往复地对所述将驯化质粒丢失的大肠杆菌进行多轮筛选，从而制备得到高感受态的大肠杆菌菌株。本发明利用同时具有正、负筛选基因的驯化质粒对细菌进行多轮筛选，最终获得可以用来制备高效感受态细菌的新菌株的方法。
感受态大肠杆菌菌株驯化筛选方法

[发明专利]一种电击转化大肠杆菌的方法-CN202211331225.6在审
发明人：吕新;刘兰英;李莹;李玥仁 -专利权人：福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种电击转化大肠杆菌的方法，属于微生物DNA转化技术领域，本发明所述方法包括大肠杆菌感受态细胞制备和大肠杆菌感受态细胞的电击转化步骤，本发明所述方法针对电转化感受态细胞制备及电转化条件中的关键因素进行筛选优化，最终所制备的感受态细胞转化效率可达1010cfu/μg DNA以上，大大提高了大肠杆菌电击转化效率。
一种电击转化大肠杆菌方法

[发明专利]一种大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化方法-CN201510954586.X在审
发明人：赵大显;张小君;陈娟;程海艳 -专利权人：深圳宏康生物科技有限公司
申请日： 2015-12-20 - 公布日： 2016-03-23 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化方法，包括如下步骤：在SOB液体培养基中培养大肠杆菌，至OD₆₀₀为0.4~0.6时加入缓冲液I，冰浴后离心收集细胞，缓冲液II重悬细胞后，分装到预冷的无菌离心管中，得到大肠杆菌感受态细胞。转化过程中，DNA与感受态细胞混匀，热击后直接涂布于培养基上，而无需冰浴和复苏步骤。本发明采用特殊配方的缓冲液制备大肠杆菌感受态细胞，其转化效率可达1.23×10⁹ cfu/µg pUC19 DNA。该方法操作简单、转化效率高，重复性好，简化了大肠杆菌感受态细胞的制备和DNA转化操作，为DNA的高效快速转化提供了技术基础。
一种大肠杆菌感受态细胞制备及其转化方法

[发明专利]大肠杆菌模板控制硫化镉尺寸和形貌的方法-CN201811251854.1有效
发明人：高宇坤;殷鹏刚 -专利权人：北京航空航天大学
申请日： 2018-10-25 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C01G11/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用大肠杆菌模板控制硫化镉形貌和大小的新方法。具体包括以下步骤：首先进行大肠杆菌增殖培养，利用Ca²⁺制备其感受态细胞，然后采取反复低渗方法处理，使大肠杆菌细胞内部空间变大。接着利用低温下和Cd²⁺作用制备其感受态细胞，感受态细胞和硫化镉体系一同孵育，利用热激处理，大肠杆菌会将硫化镉体系吸入大肠杆菌内部腔体，经过适当处理，在大肠杆菌内合成短棒状形貌硫化镉颗粒本发明直接用合成CdS的Cd(Ac)₂来代替传统的CaCl₂直接刺激菌细胞制备感受态细胞，保证了合成CdS的纯度；条件温和、工艺简单、成本低廉、形貌重复性高、
大肠杆菌形貌感受态细胞硫化镉制备模板控制合成大肠杆菌细胞硫化镉颗粒规模生产节能环保内部腔体热激处理增殖培养传统的短棒状菌细胞省略低渗孵育吸入煅烧刺激保证

[发明专利]一株适用多种感受态制备方法的高效价大肠杆菌克隆菌株及其应用-CN202110794350.X有效
发明人：夏永振;杨雨晴;荀鲁盈 -专利权人：山东大学
申请日： 2021-07-14 - 公布日： 2023-02-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株适用多种感受态制备方法的高效价大肠杆菌克隆菌株，该菌株命名为BW3KD，是以大肠杆菌野生株BW25113为出发菌株，通过敲除其基因型中的基因endA、FhuA和DeoR制得。本发明还公开了所述BW3KD菌株在用于制备高效价的大肠杆菌感受态细胞实现DNA的高效转化中的应用。实验证实，本发明的菌株适合于各种感受态制备方法，其效价在其他大肠杆菌中都处于较高位置；基于优化的TSS‑HI法与BW3KD菌株结合其感受态效价可以稳定达到7.21×109±1.85×109CFU/μg DNA；有效解决了不同大肠杆菌制备感受态细胞其效价差异明显的问题；同时该菌株具有生长快的优势，转化当天7h就可以长出单克隆
适用多种感受态制备方法高效大肠杆菌克隆菌株及其应用

[发明专利]可定植动物肠道的荧光标记大肠杆菌及其制备方法-CN201410462647.6在审
发明人：陈声;郭九标;林大川;黄浩贤 -专利权人：香港理工大学深圳研究院
申请日： 2014-09-11 - 公布日： 2016-04-06 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种可定植动物肠道的荧光标记大肠杆菌制备方法，包括：PCR扩增EGFP基因；将PCR扩增获得的EGFP基因与环状质粒载体重组，得到重组质粒；获取待定植动物肠道的大肠杆菌，并进行感受态处理后形成感受态肠道大肠杆菌；将重组质粒导入至感受态肠道大肠杆菌，形成可定植动物肠道的荧光标记大肠杆菌。采用本发明的可定植动物肠道的荧光标记大肠杆菌，工程菌构建过程中采用原始动物肠道的大肠杆菌作为宿主，并采用pCR2.1c-TOPO或pTrcHis B作为载体便于筛选，以及在逆境环境下其本身具有良好的抗性使其更具优良的存活性，相比其他肠道大肠杆菌具备更强的竞争性，并利于长久监测掌握动物肠道菌在逆境下的动态变异规律；而且还可以根据跟踪需求控制其表达。
定植动物肠道荧光标记大肠杆菌及其制备方法

[发明专利]一种大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法-CN201310021596.9无效
发明人：不公告发明人 -专利权人：康盈创新生物技术(北京)有限公司
申请日： 2013-01-22 - 公布日： 2013-04-17 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法，步骤包括在常规液体培养基中培养大肠杆菌，至OD值约为0.4左右时离心收集细胞，用氯化铷法制备感受态细胞。
一种大肠杆菌高效感受态细胞制备方法

[发明专利]一种大肠杆菌感受态细胞及其制备方法-CN202210411237.3在审
发明人：伍波;董晓宁;李勇;邹国英;吴智广;李超辉;南洋 -专利权人：天津鸿宇泰生物科技有限公司
申请日： 2022-04-19 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N1/36 文献下载
摘要：本申请涉及微生物技术领域，具体公开了一种大肠杆菌感受态细胞及其制备方法。一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法包括以下步骤：大肠杆菌单菌落的基础培养；取培养物在25‑30℃，200rpm的条件下振荡培养至OD600值为0.55‑0.6，制得菌悬液；将所述菌悬液转移到预冷的无菌离心管中，冰浴后，离心弃上清，保留细胞沉淀；向所述细胞沉淀中加入浓度为0.5‑1.5mM预冷的氯化钙溶液和浓度为0.1‑0.5%的非离子有机硅表面活性剂，冰浴后，离心弃上清，即得感受态细胞。大肠杆菌感受态细胞的转化率在1.01×109 cfu/μg以上。
一种大肠杆菌感受态细胞及其制备方法

[发明专利]一种基于毕赤酵母GS115培养的酵母外泌蛋白表达方法-CN202210825199.6在审
发明人：朱也 -专利权人：南京瑞源生物技术有限公司
申请日： 2022-07-13 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白表达技术领域，具体为一种基于毕赤酵母GS115培养的酵母外泌蛋白表达方法，该方法包含有菌株的保存与培养、试剂的配置，方法包含有蛋白质可行性分析构建载体、目的基因的克隆与重组质粒、大肠杆菌感受态的制备转化、毕赤酵母电转感受态的制备转化、蛋白鉴定。该基于毕赤酵母GS115培养的酵母外泌蛋白表达方法，蛋白质可行性分析先构建载体，然后目的基因的克隆与重组质粒，在这一过程中进行大肠杆菌感受态的制备、大肠杆菌感受态的转化、毕赤酵母电转感受态的制备与毕赤酵母感受态电击转化
一种基于酵母 gs115 培养蛋白表达方法

[发明专利]基于细菌遗传转化的纳米材料遗传毒性检测方法-CN201010547896.7无效
发明人：谢志雄;唐纬坤 -专利权人：武汉大学
申请日： 2010-11-17 - 公布日： 2011-02-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：将待检测的纳米材料与质粒DNA共同孵育：将质粒DNA等量分装于经过灭菌的管中，分别加入待检测的纳米材料，混匀后，将微量离心管置于黑暗条件下孵育；B、质粒DNA回收：孵育后，通过胶回收试剂盒回收质粒DNA并除去纳米材料；C、大肠杆菌感受态状态细胞制备：使用标准的氯化钙方法制备大肠杆菌DH5α菌株的感受态状态细胞；D、大肠杆菌感受态状态细胞的转化：利用回收得到的质粒DNA转化大肠杆菌DH5α菌株的感受态状态细胞；E、转化子计数及转化效率计算；本方法检测装置简单
基于细菌遗传转化纳米材料毒性检测方法

[发明专利]一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法-CN202310639935.3在审
发明人：秦民泽;潘小双;丁峰;唐宗兴 -专利权人：重庆极泽生物科技有限公司
申请日： 2023-05-31 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及DNA重组技术领域，公开了一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法，1.包括如下步骤：S1、活化菌株；S2、使用创新溶液反复重悬大肠杆菌细胞，制备获得感受态细胞；创新溶液中包括钙离子、锌离子与山梨醇。本方案组合使用钙离子和锌离子制备感受态细胞，锌离子具有较强的催化作用，可加速钙离子与细胞膜表面的结合，促进大肠杆菌细胞快速膨胀，提升感受态细胞制备效率；而山梨醇有效缓冲锌离子过快的催化效率带来的转化效率降低，从而有效提升制备所得感受态细胞的转化效率。本方案制备所得感受态细胞的转化效率达109CFU/ug数量级，有效满足文库构建等复杂实验对转化效率的要求，是一项极为实用的新技术，具有非常高的应用价值。
一种大肠杆菌感受态细胞制备方法

[发明专利]一种超声波辅助外源基因转化大肠杆菌的方法-CN201510594884.2在审
发明人：杨胜利;张慧 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2015-09-17 - 公布日： 2016-01-06 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种超声波辅助外源基因转化大肠杆菌的方法，所述方法为：将携带外源基因的表达质粒与大肠杆菌感受态细胞悬液混合，调节pH值至6.5～7.5，在35～37℃、超声波场强200～500W的条件下进行转化反应，转化反应结束后，筛选获得含外源基因的大肠杆菌的阳性转化子；所述大肠杆菌感受态细胞悬液是由大肠杆菌感受态细胞与二甲基亚砜混合而成；本发明所述超声波诱导基因转化方法更加环保，不依赖于细胞型，且转化率和电转化率相当
一种超声波辅助基因转化大肠杆菌方法

[发明专利]大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法-CN201210567056.6无效
发明人：万晓春;陈凤莲;赵琦;李华顺 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2012-12-24 - 公布日： 2014-07-02 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌感受态细胞的制备方法，包括如下步骤：将冷藏的大肠杆菌融化后画线接种于LB平板上，37℃培养过夜后挑取单菌落于加入了MgCl₂溶液的SOB培养基中，37℃振荡培养离心；离心液去上清，将沉淀重悬于预冷的TB转化缓冲液中，在冰上放置后4℃离心；离心液去上清，将沉淀重悬于预冷的TB转化缓冲液中，加入DMSO并轻摇混匀；将悬液在冰上放置后分装到预冷的无菌EP管中，得到大肠杆菌感受态细胞这种大肠杆菌感受态细胞的制备方法不需要低温培养，在普通37℃摇床中培养即可，与传统的感受态细胞制备方法相比，转化效率高且操作简单实用。
大肠杆菌高效感受态细胞制备方法

[发明专利]一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法-CN201610941353.0有效
发明人：侯莉;姜洋;甄丛丽;王燕;李倩;姜欣宇 -专利权人：燕山大学
申请日： 2016-10-26 - 公布日： 2019-05-28 - 主分类号： A61K47/46 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体的制备方法，其主要是取预先培养和富集好的大肠杆菌悬浮液，通过高速离心回收细胞沉淀物；加入CaCl₂溶液，重悬大肠杆菌细胞沉淀，制成感受态细胞；再加入DNaseΙ酶溶液加热、振荡后进行高速离心回收细胞沉淀物，再加入蒸馏水高速反复离心5～10次，即得大肠杆菌空腔；将大肠杆菌空腔加入磁金属盐溶液中，制成感受态细胞，加热振荡后进行高速离心，回收细胞沉淀物；再加入NaBH₄溶液加热振荡，即得到大肠杆菌@磁粒子磁靶向药物载体。
大肠杆菌磁靶向药物载体细胞沉淀物高速离心磁粒子振荡制备加热感受态细胞回收空腔蒸馏水大肠杆菌细胞高分子材料金属盐溶液骨架材料酶溶液悬浮液富集重悬沉淀合成替代

[发明专利]一种大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法-CN201210103262.1无效
发明人：付康 -专利权人：生工生物工程（上海）有限公司
申请日： 2012-04-10 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种大肠杆菌高效感受态细胞的制备方法，为将常规液体培养至对数生长期的大肠杆菌，在大肠杆菌的最适生长温度下振荡扩大培养至OD600为0.4-0.5左右，然后转入17-19℃，振荡培养0.9-1.1小时，再离心收集菌体后，采用氯化钙法制备感受态细胞。
一种大肠杆菌高效感受态细胞制备方法

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