本发明公开了一种检测细菌喹诺酮类耐药基因的引物及试剂盒,属于微生物检测技术领域。本发明提供的检测细菌喹诺酮类耐药基因的引物如SEQ ID NO1~6所示,这三种引物对能特异地扩增出多种细菌的qnrA、qnrB、qnrS三种喹诺酮类耐药基因。本发明还公开了检测细菌喹诺酮类耐药基因的试剂盒,该试剂盒中含有EvaGreen荧光染料,能实现快速检测细菌喹诺酮类抗生素相关耐药基因。本发明具有操作简便、特异性强、敏感性高、成本低廉及高通量等优点,可用于临床致病性细菌喹诺酮类耐药基因相关耐药基因的快速检测,为临床治疗提供参考。