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[发明专利]利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法-CN201210029597.3无效
发明人：潘力;王坤;杨慧林 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2012-02-10 - 公布日： 2013-03-06 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法，包括如下步骤：（1）茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因扩增，在酶原与成熟肽之间引入牛肠激酶的识别序列DDDDK；（2）基因克隆构建表达载体，转化大肠杆菌E.coliBL21（DE3）为工程菌E.coliBL21/proMTG，菌株保藏号为CCTCCM208240；（3）可溶性诱导表达转谷氨酰胺酶酶原；（4）亲和层析纯化蛋白，获得转谷氨酰胺酶酶原；（5）采用牛肠激酶激活酶原为成熟的转谷氨酰胺酶。本发明获得的转谷氨酰胺酶生物活性高；简化了发酵生产工艺，可以特异性完整切除转谷氨酰胺酶酶原序列，不会因非特异性切割或长时间切割导致酶的降解。
利用谷氨酰胺酶酶原生产微生物方法

[发明专利]一种基因工程菌及其生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法-CN201310428446.X无效
发明人：陈坚;堵国成;王淼;刘松;万丹 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-09-18 - 公布日： 2014-01-08 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：一种基因工程菌及其生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法，是用来自吸水链霉菌CCTCC M203062的谷氨酰胺转胺酶酶原，构建重组表达载体pINA1297-proTG，并将其转化解脂耶氏酵母得到基因工程菌，并用基因工程菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原本申请构建的基因工程菌具有谷氨酰胺转胺酶酶原表达量高的优点，适于在工业生产中应用。
一种基因工程及其生产谷氨酰胺转胺酶酶原方法

[发明专利]一种分泌谷氨酰胺转胺酶酶原的大肠杆菌及其应用-CN201010581546.2无效
发明人：陈坚;堵国成;刘松;张东旭 -专利权人：江南大学
申请日： 2010-12-10 - 公布日： 2011-07-13 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种分泌谷氨酰胺转胺酶酶原的大肠杆菌及其应用，属于分子生物学技术领域。是将谷氨酰胺转酶酶原基因TG3989(GenBank NO：HM231108)导入大肠杆菌BL21(DE3)得到的重组大肠杆菌，在本表达体系中，谷氨酰胺转胺酶酶原被分泌至胞外，可以在胞外进行酶原的活化，为谷氨酰胺转胺酶的工业化生产提供了一种新方法。
一种分泌谷氨酰胺转胺酶酶原大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶酶原基因及其表达-CN200710023771.2无效
发明人：陈坚;吴敬;堵国成;任增亮 -专利权人：江南大学
申请日： 2007-07-09 - 公布日： 2008-02-20 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：一种吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶酶原基因及其表达，属于分子生物学领域。本发明提供了吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)CCTCC M203062(中国专利：03152956.9，2003)的谷氨酰胺转胺酶酶原的基因序列；进一步提供了能够使该基因编码的酶原可溶性表达的载体系统和宿主系统，利用该表达系统可以获得一部分可溶性表达的酶原，利用胰蛋白酶处理酶原可以得到有活性的谷氨酰胺转胺酶。
一种吸水霉菌谷氨酰胺转胺酶酶原基因及其表达

[发明专利]大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法-CN200810220160.1有效
发明人：潘力;杨慧林;苗小康;崔翠 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2008-12-19 - 公布日： 2010-04-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法，该方法包括如下几个步骤：(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列，设计PCR引物进行PCR扩增，克隆到原核表达载体pET22b(+)中，构建表达载体pET22b-proMTG，转化为大肠杆菌E.coli BL21/proMTG，该菌株保藏号为CCTCC M 208240；(2)可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原；(3)转谷氨酰胺酶酶原的激活本发明方法的转谷氨酰胺酶产量及比活力达到直接在大肠杆菌中表达形成包涵体并经变性及复性生产该酶的水平，而且发酵生产工艺更简单。
大肠杆菌及其可溶性表达谷氨酰胺酶酶原方法

[发明专利]一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用-CN201010582053.0有效
发明人：周哲敏;杨晓燕 -专利权人：江南大学
申请日： 2010-12-10 - 公布日： 2011-07-13 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用，属于蛋白质工程技术领域。通过对吸水链霉菌发酵液进行纯化得到了一种能够活化谷氨酰胺转胺酶酶原的新型酶，该酶可用于将谷氨酰胺转胺酶酶原直接转化成活性酶，解决了酶原向酶转化的问题，缩短了发酵时间，提高了发酵产量。
一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用

[发明专利]一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法-CN201310340689.8有效
发明人：陈坚;王广圣;陈康康;刘松;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-08-07 - 公布日： 2013-11-27 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法，以谷氨酰胺转胺酶酶原突变体E62D-tag1为出发菌株，用氨水控制pH不小于7，当溶氧反弹时开始指数流加方式补料；至诱导浓度时，添加甘氨酸和CaCl2，采用本发明的方法可以大大提高谷氨酰胺转胺酶酶原的产量。
一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原方法

[发明专利]一种高效表达谷氨酰胺转胺酶的基因工程菌及其应用-CN201310226603.9有效
发明人：陈坚;堵国成;王淼;刘松;万丹 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-06-07 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效表达谷氨酰胺转胺酶的基因工程菌及其应用，其表达的吸水链霉菌CCTCC M203062谷氨酰胺转胺酶酶原酶原区基因与成熟酶区基因之间引入酵母内源Kex2蛋白酶的切割位点Lys-Arg，所述酶原使用表达载体在解脂耶氏酵母中进行表达。采用本发明提供的基因工程菌进行发酵生产谷氨酰胺转胺酶可实现谷氨酰胺转胺酶自主活化，不需要外源蛋白酶的作用，能有效的降低生产成本，简化生产步骤。
一种高效表达谷氨酰胺转胺酶基因工程及其应用

[发明专利]一种止血剂及其制备方法和应用-CN201210192240.7有效
发明人：金明飞;刘明耀;高红亮;易正芳 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2012-06-12 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： A61L15/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种止血剂，包括明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原以及所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂；所述明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原和激活剂的比例为100000:1~200:1~100。
一种止血剂及其制备方法应用

[发明专利]源自微生物的转谷氨酰胺酶的制备方法-CN00814437.0无效
发明人：田口精一;百濑春生 -专利权人：味之素株式会社
申请日： 2000-10-13 - 公布日： 2002-11-13 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及利用微生物分泌生产转谷氨酰胺酶的方法。本发明还涉及大量制备转谷氨酰胺酶的方法,该方法的特征在于,通过培养用含有源自放线菌的转谷氨酰胺酶基因以及该基因原有的(天然的)启动子的表达质粒转化的链霉菌属细菌,在培养初期至中期使转谷氨酰胺酶原分泌,在培养后期由源自链霉菌属细菌的蛋白酶等切去前体结构部分,获得成熟型(活性型)的转谷氨酰胺酶。
源自微生物谷氨酰胺制备方法

[发明专利]一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法-CN201210052578.2有效
发明人：潘力;王坤;杨慧林;钟景儒 -专利权人：华南理工大学;广州市澳键丰泽生物科技有限公司
申请日： 2012-03-01 - 公布日： 2012-07-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法，该重组菌株由以下步骤构建得到：(1)通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接，再将融合PCR扩增产物转化入枯草芽孢杆菌WB800，得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S；(2)PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因，然后将扩增产物转化入枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S将枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG发酵、纯化，得到可溶性的转谷氨酰胺酶。本发明方法可以在发酵液上清中直接获得具有生物活性的转谷氨酰胺酶，省去了繁琐的细胞破碎、纯化后激活酶原等过程，简化了发酵生产工艺。
重组枯草芽孢杆菌生产谷氨酰胺方法

[发明专利]转谷氨酰胺酶的制备方法-CN00813733.1有效
发明人：菊池庆实;伊达雅代;梅泽有希子;横山敬一;松井裕 -专利权人：味之素株式会社
申请日： 2000-09-29 - 公布日： 2002-10-30 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及在棒杆菌中分泌生产外源蛋白,特别是转谷氨酰胺酶的方法。本发明提供通过使工业生产上有用的外源蛋白,特别是转谷氨酰胺酶在棒杆菌中生成,并有效地释放到菌体外(分泌生产)来制备外源蛋白,特别是转谷氨酰胺酶的方法。使用编码源自棒杆菌的信号肽区的序列下游结合含有前体结构部分的目的外源蛋白质基因序列,特别是转谷氨酰胺酶原基因序列的表达重组体,将该表达型基因重组体导入棒杆菌,培养转化的棒杆菌,释放到菌体外的蛋白质通过用蛋白酶等进行处理切去前体结构部分,制备目的外源蛋白质,特别是转谷氨酰胺酶。
谷氨酰胺制备方法

[发明专利]一种能有效提高蛋白分泌效率的信号肽及其应用-CN201710990073.3在审
发明人：潘力;刘欣;叶燕锐;王斌 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2017-10-23 - 公布日： 2018-04-20 - 主分类号： C07K14/32 文献下载
摘要：本发明通过从枯草芽孢杆菌同源蛋白信号肽库中，构建该信号肽与β‑半乳糖苷酶编码基因/转谷氨酰胺酶酶原编码基因相结合的表达载体，筛选出能提高β‑半乳糖苷酶分泌的信号肽，实现转谷氨酰胺酶酶原的分泌表达。
一种有效提高蛋白分泌效率信号肽及其应用

[发明专利]一种可提高分泌效率的信号肽及其应用-CN201710990101.1在审
发明人：潘力;刘欣;叶燕锐;王斌 -专利权人：华南理工大学
申请日： 2017-10-23 - 公布日： 2018-02-16 - 主分类号： C07K14/32 文献下载
摘要：同时构建该信号肽与转谷氨酰胺酶酶原编码基因相结合的表达载体，实现了转谷氨酰胺酶酶原的分泌表达。
一种提高分泌效率信号肽及其应用

[发明专利]一种杂交链霉菌胰蛋白酶酶原及其应用-CN201210275348.2无效
发明人：陈坚;令桢民;堵国成;康振;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2012-08-03 - 公布日： 2013-01-02 - 主分类号： C12N9/76 文献下载
摘要：本发明公开了一种获得杂交链霉菌胰蛋白酶酶原及其及其在产活性链霉菌胰蛋白酶中的应用，通过将体外所得的胰蛋白酶酶原基因连接到毕赤酵母GS115（Pichia pastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达杂交胰蛋白酶酶原的基因工程菌，发酵3～4天后，可得到杂交胰蛋白酶酶原的表达(图3(A)，解决了基础研究中获得杂交灰色链霉菌胰蛋白酶酶原的问题。并且通过肠激酶切割活化得到具有活性的链霉菌胰蛋白酶，活化后酰胺酶活力可达到1.4U/ml(图3(B))。应用该菌种生产杂交胰蛋白酶酶原，产量高、工艺简单、便于基础研究中胰蛋白酶酶原晶体结构的研究和应用，并且提供了一种通过活化杂交胰蛋白酶酶原获得活性链霉菌胰蛋白酶的方法。
一种杂交霉菌胰蛋白酶及其应用

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