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[发明专利]鹅原代肝细胞的分离培养方法-CN201110375632.2无效
发明人：韩春春;王继文;潘志雄;刘贺贺;李亮;许峰;许恒勇;康波;魏守海;何桦 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2011-11-23 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种鹅原代肝细胞的分离培养方法，涉及生物技术领域。操作步骤：鹅肝脏洗干净；肝灌流；用酶灌流液反复灌流，直至肝被膜下组织呈龟背状裂隙；肝脏剪碎；将剪碎的肝组织和胶原酶液水浴继续消化；加入胎牛血清的DMEM培养基终止其消化；过滤，获得肝细胞悬液；离心肝细胞悬液，在沉淀中加入PBS，再次制成肝细胞悬液；往肝细胞悬液中加入含胎牛血清的DMEM培养基，并把细胞吹打均匀；对细胞进行计数后，用DMEM培养液稀释，接种到细胞培养皿中，培养，使之贴壁；肝细胞培养后，用PBS清洗，获得活的原代肝细胞；加入胎牛血清的DMEM培养基培养。本发明解决了目前尚未有完善的鹅原代肝细胞分离培养方法的问题。
鹅原代肝细胞分离培养方法

[发明专利]长爪沙鼠原代肝细胞的培养方法-CN201210437161.8有效
发明人：陈立青;郭红刚;李长龙;卢领群;萨晓婴;戴方伟;宋晓明 -专利权人：浙江省医学科学院
申请日： 2012-11-05 - 公布日： 2013-03-06 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种长爪沙鼠原代肝细胞的培养方法，包括：（1）从消化成熟的离体长爪沙鼠肝脏中收集肝细胞初悬液，过滤，滤液除杂后加入含5%小牛血清的HBSS，反复离心洗涤，收集细胞沉淀于含20%新生牛血清的DMEM完全培养基中，调整肝细胞浓度为3.0×105个～5.0×105个/mL，制备成肝细胞悬液；（2）将肝细胞悬液接种于铺有鼠尾胶原的培养板中，于37℃、5%CO2环境中培养，4h后除杂，将培养基更换成含细胞因子的维持培养基，细胞贴壁过夜后，得到长爪沙鼠原代肝细胞。该方法价格低廉，经济实用，操作简便易行，获得的肝细胞贴壁牢、活力高，培养细胞的成活率高，稳定可靠，适于大规模生产。
长爪沙鼠原代肝细胞培养方法

[发明专利]一种绵羊原代肝细胞分离培养方法-CN202210510142.7有效
发明人：卢曾奎;陈博雯;窦晓宁;李建烨;岳耀敬;袁超;郭婷婷;刘建斌;杨博辉 -专利权人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
申请日： 2022-05-11 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明属于动物细胞培养技术领域，本发明提供了一种绵羊原代肝细胞分离培养方法。本发明方法包括采用直接破碎法或酶消化法对绵羔羊肝脏组织进行处理，得肝细胞悬液；将上述所得肝细胞悬液离心后弃上清，得沉淀a；将上述所得沉淀a与红细胞裂解液混合，静置后离心弃上清，得沉淀b；将上述所得沉淀b与完全培养基混合，置于鼠尾胶原包被的6孔板中培养，得肝细胞培养物；弃去上述所得肝细胞培养物中的未贴壁肝细胞和死细胞，将剩余的贴壁细胞与完全培养基混合进行培养等步骤。本发明方法制备得到的绵羊原代肝细胞增殖稳定，形态特征典型，具有传代和增殖能力。
一种绵羊肝细胞分离培养方法

[发明专利]一种利用猪原代肝细胞和hNTCP重组慢病毒建立乙肝病毒感染细胞模型的方法-CN201711220061.9有效
发明人：周明 -专利权人：立沃生物科技（深圳）有限公司
申请日： 2017-11-29 - 公布日： 2021-02-09 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用猪原代肝细胞和hNTCP重组慢病毒建立乙肝病毒感染细胞模型的方法，属于细胞改造技术领域。其包括如下步骤：步骤1：制备hNTCP重组慢病毒浓缩液；步骤2：制备消化完全的肝组织；步骤3：制备猪原代肝细胞；步骤4：制备猪原代肝细胞单细胞悬液；步骤5：制备铺板用细胞悬液；步骤6：细胞铺板与培养；步骤7：对猪原代肝细胞进行hNTCP重组慢病毒感染；步骤8：建立乙肝病毒感染细胞模型。本发明在体外构建含hNTCP基因的重组慢病毒，通过高感染效率的慢病毒将hNTCP基因整合到猪原代肝细胞基因组中，实现hNTCP稳定过表达，使猪原代肝细胞支持乙肝感染。
一种利用猪原代肝细胞 hntcp 重组病毒建立乙肝病毒感染细胞模型方法

[发明专利]鲤鱼原代肝细胞的提取和培养方法-CN201610234530.1有效
发明人：杨明;李意捷;雷鹏辉;蒋丽辉;吴明红 -专利权人：上海大学
申请日： 2016-04-15 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种鲤鱼原代肝细胞的提取和培养方法，适用于生物工程技术领域，选鲤鱼进行解剖，无菌取肝脏并剪碎，用胰蛋白酶消化后经细胞筛过滤得细胞悬液，后经Percolll纯化，加入含有鲤鱼血清的培养液得到新的细胞悬液；用血小球计数板进行计数，再以最适培养条件铺板法培养增殖，最后对得到的原代肝细胞多种方法镜检鉴定。本发明鲤鱼原代肝细胞的纯化和培养方法直接无菌取鲤鱼肝脏，经Percolll纯化肝细胞，经鉴定，确实得到了数量多、纯度高的离体鲤鱼原代肝细胞，并用鲤鱼血清代替传统培养基中的配牛血清，提高了所提取离体细胞的活力，为进一步开展鲤鱼原代肝细胞毒理试验及其他实验打下基础。
鲤鱼肝细胞提取培养方法

[发明专利]一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法-CN201811026047.X有效
发明人：陈大伟;刘茵茵;马丽娜;蒲俊华;张静;葛庆联;唐修君;贾晓旭;樊艳凤;黄胜海;顾荣;高玉时 -专利权人：江苏省家禽科学研究所
申请日： 2018-09-04 - 公布日： 2021-06-04 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了细胞毒理技术领域的一种鸡胚肝细胞体外分离培养及脂肪变性模型建立方法。该方法包括如下步骤：(1)取SPF鸡胚；(2)剪碎；(3)消化；(4)离心：弃上清，留取沉淀物加入预热的Williams’E完全培养液重悬，得到细胞悬液B；(5)细胞分离：采用Percoll密度梯度离心；(6)取肝细胞：吸取界面处细胞加入D‑Hank’s液吹打混匀，置于离心机离心，弃上清，留取沉淀物加D‑Hank’s液冲洗重悬，重复离心2‑3次，弃上清，留取沉淀物并加入Williams’E完全培养液，得到细胞悬液C；(7)计数；(8)种板；(9)换液；(10)诱导脂肪变性：种板后30‑40h后，更换诱导剂进行培养，培养10‑15h，获得脂肪变性肝细胞。本发明能够快速获得原代培养细胞，纯度高，同时诱导时间短。
一种肝细胞体外分离培养脂肪变性模型建立方法

[发明专利]一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法-CN201910642236.8在审
发明人：林仁勇;毕晓娟;李亮;吕国栋;杨宁;刘辉 -专利权人：新疆医科大学第一附属医院
申请日： 2019-07-16 - 公布日： 2019-10-15 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明为一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法。一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法，包括：(1)原位灌注：在泡球蚴感染动物肝脏中，经门静脉，依次用前灌注液、后灌注液1和后灌注液2原位灌注肝脏后，取下肝脏制成肝内细胞悬液；(2)梯度离心：将肝内细胞悬液离心后，得上清液1和下层的沉淀物1；用D‑Hanks液离心洗涤沉淀物1，得肝细胞；将上清液1离心后，收集下层的沉淀物2；向沉淀物2中依次加入GBSS‑B、Nycodenz分离液、GBSS‑B，离心，收集白色的环状层，用GBSS‑B离心洗涤，弃上清液，得肝星状细胞。本发明所述的一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法，可同时提取分离出泡球蚴感染动物中的肝细胞与肝星状细胞。
肝星状细胞感染动物肝细胞球蚴灌注液上清液肝脏离心洗涤细胞悬液原位灌注下层梯度离心提取分离分离液环状层门静脉取下

[发明专利]应用特异性抗体分离小型肝细胞的方法-CN200580029168.4无效
发明人：三高俊广;今纯子 -专利权人：独立行政法人科学技术振兴机构
申请日： 2005-06-29 - 公布日： 2007-08-01 - 主分类号： G01N33/48 文献下载
摘要：本发明提供一种来自包括人在内的哺乳动物的增殖性肝细胞(小型肝细胞)的高效分离方法。特别是提供一种包含下述步骤的小型肝细胞分离方法：i)将含有来自哺乳动物肝脏的细胞的细胞悬液与选自针对CD44的抗体(抗CD44抗体)、针对D6.1A的抗体(抗D6.1A抗体)、和针对BRI3的抗体(抗BRI3抗体)中的一种或以上的抗体接触，使上述细胞悬液中所含小型肝细胞与上述一种或以上的抗体形成免疫复合物的步骤；ii)回收含有小型肝细胞的上述免疫复合物的步骤。
应用特异性抗体分离小型肝细胞方法

[发明专利]一种对乙型肝炎病毒易感的人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法及应用-CN201410009255.4无效
发明人：胡康洪;周明;祁燕;李家福;成细瑶 -专利权人：康珞生物科技（武汉）有限公司
申请日： 2014-01-09 - 公布日： 2014-04-23 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种对乙型肝炎病毒易感的人胎肝细胞分离、冻存与复苏的方法及应用，步骤为：将新鲜的肝组织经暴露的血管用灌注溶液冲洗干净，直至消化完全；然后将新鲜分离的肝细胞置于含有细胞洗液的培养皿中过细胞筛得到单细胞悬液；清洗后沉淀单细胞并重悬，用渐进冻存的方法，保存于液氮；复苏的胎肝细胞通过优化高活力胎肝细胞的铺板密度、Percoll离心介质纯化低活力胎肝细胞以及后续培养程序，建立紧密的细胞单层培养。本发明可大量分离、保存及高效率复苏胎肝细胞，复苏的胎肝细胞能保持良好的肝细胞特性、分化状态及对乙型肝炎病毒易感性，从而缓解原代肝细胞资源稀缺问题，并建立了稳定的体外抗乙型肝炎病毒筛药平台。
一种乙型肝炎病毒肝细胞分离复苏方法应用

[发明专利]一种原代肝细胞体外复极性的方法-CN201510579427.6在审
发明人：汪艳;杨金连 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2015-09-11 - 公布日： 2015-12-09 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种原代肝细胞体外复极性的方法，将原代肝细胞悬液通过灌注种植的方式种植于细胞培养池中，同时对原代肝细胞施加紧凑力，使单位体积细胞密度达到90％以上，之后用肝细胞表型无血清培养液进行灌注培养。本发明以力学紧凑种植方式种植原代成熟肝细胞群，肝细胞在结构和功能学上的复极性均提前至种植后第12h形成，加快了体外肝细胞群在三维环境下的复极性速度，可为肝组织工程提供具有近似生理功能表型的原代成熟肝细胞
一种肝细胞体外极性方法

[发明专利]包囊的肝细胞组合物-CN201080018844.9有效
发明人：克拉希米拉·亚历山大德罗娃;彼得·佩迪亚迪塔基斯;约·萨里斯布瑞;沃尔夫冈·吕丁格 -专利权人：齐托内两合公司
申请日： 2010-04-27 - 公布日： 2012-04-11 - 主分类号： A61K9/50 文献下载
摘要：一种微胶囊，其包含胶囊壳，所述胶囊壳包囊有与肝细胞刺激量的促红细胞生成素物理接触的治疗有效量的肝细胞悬液。
包囊肝细胞组合

[发明专利]一种原代肝细胞体外复极性的培养方法-CN201510578764.3有效
发明人：汪艳;杨金连 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2015-09-11 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种原代肝细胞体外复极性的培养方法，将肝细胞上样于微孔培养板，50g‑250g离心1‑10min，去除微孔培养板表面多余细胞悬液，加入肝细胞表型无血清培养液进行培养。本发明以力学紧凑种植方式种植原代成熟肝细胞群，肝细胞在结构和功能学上的复极性均提前至种植后第12h形成，加快了体外肝细胞群在三维环境下的复极性速度，可为肝组织工程提供具有近似生理功能表型的原代成熟肝细胞
一种肝细胞体外极性培养方法

[发明专利]原代肝细胞的分离制备方法-CN201510284714.4有效
发明人：包骥;步宏;石毓君 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2015-05-28 - 公布日： 2018-08-03 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种原代肝细胞的分离制备方法，它包括如下步骤：a、肝脏的体外灌流：取离体的动物肝脏，先用灌流液Ⅰ灌流，灌流速度为300‑1000mL/min，灌流时间为10‑12分钟；再用灌流液Ⅱ灌流，灌流速度为300‑1000mL/min，灌流时间为2‑3分钟；最后用灌流液Ⅲ灌流，灌流速度为400‑1200mL/min，灌流时间为25‑40分钟；b、分离肝细胞：洗涤步骤a处理后的肝脏，收集肝细胞悬液，过滤、离心本发明原代肝细胞的分离制备方法，可以分离得到的肝细胞数量、活率与纯度均较高的肝细胞，应用前景良好。
肝细胞分离制备方法

[发明专利]体外肝细胞异质性培养装置及其培养方法-CN201611067530.3在审
发明人：李阳;高毅;王高尚;贾志栋;彭青;张志 -专利权人：南方医科大学珠江医院
申请日： 2016-11-28 - 公布日： 2017-03-15 - 主分类号： C12M3/04 文献下载
摘要：本发明提供一种体外肝细胞异质性培养装置，包括诱导芯片和与所述诱导芯片相连通的微量注射泵；所述诱导芯片包括用于形成浓度梯度的流体分流通道以及与所述流体分流通道相通的细胞诱导区域；还提供一种体外肝细胞异质性培养方法，采用所述的体外肝细胞异质性培养装置；将肝细胞悬液加入到所述细胞诱导区域并等待所述肝细胞贴壁生长；从所述流体分流通道持续匀速通入不同浓度或不同成分的诱导液，以便诱导形成异质性分布的肝细胞。通过本方案可实现体外诱导体外肝细胞异质性分布。
体外肝细胞异质性培养装置及其方法

[发明专利]微囊化胎肝细胞悬液的制法-CN02114357.9无效
发明人：张阳德 -专利权人：张阳德
申请日： 2002-08-23 - 公布日： 2004-02-25 - 主分类号： C12N5/08 文献下载
摘要：一种微囊化胎肝细胞悬液的制法，其特征是：用PSV质粒与SV40片段溶液混合，加入一种链接酶使其链接成PRSV40质粒，再加入脂质体使该质粒转染到预培植的肝细胞中；用海藻酸钠与多聚赖氨酸制成一种微囊包裹物，将上述两者混合，通过微囊发生器产生负压的作用，使转染到肝细胞中的PRSV40质粒分散于微囊包裹物内，形成微囊化胎肝细胞悬液。使用本发明，能获得大量具有增殖活性的人胎肝细胞，将其移植于病人体内后，能避免免疫排斥反应，因此可以广泛应用于临床肝病患者的治疗。
微囊化胎肝细胞制法

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