本发明提供一种结核分枝杆菌变态反应原组合物及其制备方法与应用。本发明的结核分枝杆菌变态反应原组合物由CFP10融合蛋白和Esat‑6重组蛋白(SEQ ID NO:2)等量混合而成。其中,所述CFP10融合蛋白是由n个如SEQ ID NO:3所示的结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3874的T细胞表位肽之间通过Linker串联得到。按照上述设计合成基因序列,转入原核表达系统,表达蛋白质,纯化后等量混合,作为皮试反应原,用于结核病感染的诊断等相关领域。
本发明发明了一种用于荧光定量PCR检测结核分枝杆菌复合群的引物探针及方法,所述引物探针包括两套上下游引物及探针,其序列分别如IS‑F1(SEQ ID NO:1)、IS‑F2(SEQ IDNO:3)、IS‑R1(SEQ ID NO:2)和IS‑R2(SEQ ID NO:4);探针IS‑FAM1(SEQ ID NO:5)和IS‑FAM2(SEQ ID NO:6);利用所述检测试剂荧光定量PCR扩增检测结核分枝杆菌复合群的方法,包括以下步骤:将待测基因样本与所述检测试剂混合,放置在荧光定量PCR仪中,采用touchdown循环程序,在退火阶段检测荧光值,根据有无荧光值,判断待检测基因样本是否属于结核分枝杆菌复合群。相对于现有技术,本发明通过检测结核分枝杆菌中的基因组,更加灵敏特异地检测结核分枝杆菌基因,有效区分结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌。