本发明公开了一种EGFR和HER2基因突变检测试剂盒,其包括:EGFR突变检测试剂,其包括EGFR基因外显子18、19、20、21特异性引物及dNTP溶液,所述特异性引物为SEQ ID NO:1和SEQID NO:2;HER2突变检测试剂,其包括HER2基因外显子20特异性引物及dNTP溶液,所述特异性引物为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。本发明还公开了一种利用EGFR和HER2基因突变检测试剂盒检测EGFR和HER2基因突变的方法,EGFR和HER2基因突变检测试剂盒的应用,该试剂盒用于检测与肺癌及其他癌症相关的EGFR和HER2基因突变