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[发明专利]一种高比活力碱性磷酸酶工程菌、工程菌构建及碱性磷酸酶纯化方法-CN202010530428.2在审
发明人：高玉舟;李海超;何欣;乔善鹏;刘珍妮 -专利权人：济南国科医工科技发展有限公司
申请日： 2020-06-11 - 公布日： 2020-09-15 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明公开了一种高比活力碱性磷酸酶工程菌、工程菌构建及碱性磷酸酶纯化方法，属于生物工程技术领域。本发明通过对Cobetia marina的碱性磷酸酶基因进行密码子优化，利用优化后的碱性磷酸酶基因构建工程菌，该工程菌的保藏编号为CGMCC NO.18926。本发明还对蛋白的纯化方法进行了创新，用本发明中的提纯方法，可以得到最终纯度大于95％的酶蛋白，比活力可达12000U/mg，相对现有国际上常见的碱性磷酸酶，是一种活力极高的碱性磷酸酶，为进一步实现工业化铺垫，也为工业大规模生产碱性磷酸酶提供了有效地方法。
一种活力碱性磷酸酶工程构建纯化方法

[发明专利]一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用-CN201710192378.X在审
发明人：袁翰;黄桂成 -专利权人：南京中医药大学
申请日： 2017-03-28 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12Q1/66 文献下载
摘要：一种基于萤光素校正的细胞碱性磷酸酶活性检测方法在药物筛选中的应用，本发明属于生物医药领域，涉及一种检测细胞中碱性磷酸酶活力的方法，包括以下步骤A、对培养的细胞进行基因工程修饰，导入非分泌型萤光素酶报告基因本发明提供的技术方案通过结合萤光素酶报告基因手段达到量化细胞活力量化的目的，从而指示药物干预中细胞碱性磷酸酶活力和细胞活力两个维度的信息，并最终形成参数化指标反映不同药物对单个细胞碱性磷酸酶活力的影响。
一种基于萤光校正细胞碱性磷酸酶活性检测方法药物筛选中的应用

[发明专利]利用石墨烯量子点作为荧光探针检测碱性磷酸酶浓度的方法-CN201910385806.X在审
发明人：黄珊;肖琦;姚建东;刘义 -专利权人：南宁师范大学
申请日： 2019-05-09 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用石墨烯量子点作为荧光探针检测碱性磷酸酶浓度的方法，包括：步骤一、配制含不同浓度的碱性磷酸酶的多个标准溶液，分别检测其荧光强度F；步骤二、配制对照溶液，并检测其荧光强度F₀；步骤三、建立F/F₀与碱性磷酸酶浓度之间的线性关系式；步骤四、检测碱性磷酸酶浓度未知的待测溶液的荧光强度值，再代入步骤三得到的线性关系式中，计算出待测溶液中碱性磷酸酶浓度本发明利用石墨烯量子点作为荧光探针检测碱性磷酸酶浓度，操作简单、检测时间快且灵敏度高。石墨烯量子点探针的荧光强度变化值与碱性磷酸酶活力单位呈良好的线性关系，相关系数为0.993，对碱性磷酸酶的浓度检测限可达到1.82U/L。
碱性磷酸酶量子点石墨烯荧光探针检测荧光检测线性关系式待测溶液配制碱性磷酸酶活力荧光强度变化标准溶液对照溶液浓度检测线性关系磷酸酶灵敏度中碱性探针

[发明专利]在酵母中表达原核碱性磷酸酶-CN202210118943.9有效
发明人：高山;贝锦龙;徐国峰;杨珺;汪和睦;米东;周浩;魏东盛;梁剑光;李鑫 -专利权人：南开大学
申请日： 2022-02-08 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明涉及一种在酵母中表达原核碱性磷酸酶的方法，用以表达来自海科贝特菌(Cobetia marina)的碱性磷酸酶CmAP。该方法可以用于生产具有高比活力、高稳定性、高糖基化的重组碱性磷酸酶，提高其纯品的单位发酵液产量，并简化纯化工艺。
酵母表达碱性磷酸酶

[发明专利]碱性磷酸酶突变体及其制备方法和应用-CN202211088891.1在审
发明人：张雅洁;宫安;罗漫杰;施婧妮;徐灿;王梁 -专利权人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明涉及一种碱性磷酸酶突变体及其制备方法和应用。该碱性磷酸酶突变体包括：由野生型碱性磷酸酶发生如下突变中的至少一种得到的多肽，野生型碱性磷酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，突变包括：第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代、第113位的组氨酸被谷氨酸替代通过将第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代或者将第113位的组氨酸被谷氨酸替代，能减弱野生型碱性磷酸酶蛋白分子二聚体界面处的氢键强度，从而减弱了酶的热稳定性，提高酶的热敏感性。经试验验证，与野生型碱性磷酸酶相比，本研究的碱性磷酸酶突变体的稳定性和比活力均有大幅度提高，蛋白比酶活大于1200U/mg，65℃15min可以完全失活。
碱性磷酸酶突变体及其制备方法应用

[发明专利]基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT-proBNP检测试剂盒及其应用-CN202010964941.2在审
发明人：高玉舟;李海超;何欣;乔善鹏;刘珍妮 -专利权人：济南国科医工科技发展有限公司
申请日： 2020-09-15 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： G01N33/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT‑proBNP检测试剂盒及其应用，属于免疫化学检测技术领域。本发明对酶‑抗体以及磁珠‑抗体的连接方法进行了优化，大大降低了酶和磁珠对抗原‑抗体之间结合的影响，极大提高了检测灵敏度；同时采用比活力更高的碱性磷酸酶CmAP代替现有商品化的碱性磷酸酶BIAP，使检测的灵敏度得到进一步的提高
基于活力碱性磷酸酶构建 nt probnp 检测试剂盒及其应用

[发明专利]IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白-CN201010275380.1有效
发明人：唐金宝;杨洪鸣;梁淑娟;陈永 -专利权人：潍坊医学院
申请日： 2010-09-08 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白，是IgG抗体亲和肽和碱性磷酸酶构成的融合蛋白，能作为替代酶标记抗体用于免疫测定，其一经产生即具有与IgG抗体的结合活性和AP催化活性，且二者标记比例为1∶1；该融合蛋白的酶比活力为386±82U/mg；与兔IgG抗体的亲和常数Ka≌6.7×107L·mol-1。本发明的IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白的制备方法如下：(1)将IgG抗体亲和肽基因和碱性磷酸酶基因连接，构建重组载体；(2)电转化巴斯德毕赤酵母；(3)经G418抗性压力筛选高拷贝表达菌株；(4)培养菌株，诱导表达；(5)提取纯化IgG抗体亲和肽-碱性磷酸酶融合蛋白。
igg 抗体亲和碱性磷酸酶融合蛋白

[发明专利]一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶的方法-CN201110326360.7无效
发明人：王艳鸽;冯书营;盛俊民;丁勇;董烁 -专利权人：河南大学
申请日： 2011-10-25 - 公布日： 2012-02-29 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶的方法，通过以下步骤制备：（一）制备腹水；（二）制备碱性磷酸酶免疫亲和层析柱；（三）纯化抗碱性磷酸酶单克隆抗体；（四）制备抗碱性磷酸酶单克隆抗体的免疫亲和层析柱；（五）提纯碱性磷酸酶。此方法能够快速提取大量碱性磷酸酶，所提取的碱性磷酸酶纯度高、活性高。
一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶方法

[发明专利]一种基于NH2-CN201811437345.8有效
发明人：林天然;秦雨欣;李金莹;覃思媛;黄媛林;侯丽 -专利权人：广西师范大学
申请日： 2018-11-28 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于NH2‑Cu‑MOF的可视化检测血清中碱性磷酸酶活性的方法，先合成NH2‑Cu‑MOF纳米酶材料；再利用NH2‑Cu‑MOF纳米酶和琼脂糖制备检测碱性磷酸酶活性的凝胶检测管；最后将碱性磷酸酶加到凝胶检测管后，将凝胶检测管置于紫外灯下，通过观察颜色变化实现半定量检测；然后用手机或数码相机拍照，通过RGB颜色提取器软件，读取测定照片中RGB值，分析RGB值来指示OPD的氧化程度，从而实现对血清中碱性磷酸酶活性的现场可视化多色荧光定量检测；检测时，先绘制凝胶颜色随碱性磷酸酶活力大小变化的工作曲线该方法不需要昂贵的仪器和设备，不需要生物酶的参与，无需专业人员操作即可实现对血清中碱性磷酸酶的现场可视化多色荧光测定。
一种基于 nh base sub

[发明专利]一种碱性磷酸酶结合物的合成工艺-CN201010192646.6无效
发明人：钱纯亘;李可;张裕平 -专利权人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司
申请日： 2010-06-04 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： G01N33/535 文献下载
摘要：本发明涉及碱性磷酸酶结合物的合成方法，包括：步骤a)，用碳二亚胺活化碱性磷酸酶分子的羧基，生成活性碱性磷酸酶酯；步骤b)，加入待结合物，使得碱性磷酸酶酯与待结合物的合成反应，生成碱性磷酸酶结合物。
一种碱性磷酸酶结合合成工艺

[发明专利]嵌合型碱性磷酸酶样蛋白-CN202010673719.7在审
发明人：威兰姆·拉本;路易吉·约翰内森·科尼利厄斯·琼克;埃瑞克·简·范·德·伯格;安德里亚·范·埃尔萨斯;乔西·路易斯·米兰 -专利权人：安-法玛公司
申请日： 2015-01-26 - 公布日： 2020-10-16 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明涉及嵌合型碱性磷酸酶样蛋白，以及改进的碱性磷酸酶、包括改进的碱性磷酸酶的药物组合物，以及改进的碱性磷酸酶在预防、治疗或治愈疾病中的用途。本发明提供的改进的磷酸酶具有改善的性能。
嵌合碱性磷酸酶蛋白

[发明专利]碱性磷酸酶标记试剂盒、免疫测定试剂盒及免疫测定方法-CN200810090640.0有效
发明人：土屋博;小田原卓哉 -专利权人：希森美康株式会社
申请日： 2008-04-02 - 公布日： 2008-10-08 - 主分类号： G01N33/58 文献下载
摘要：本发明提供一种碱性磷酸酶标记检测用试剂盒，包括可与靶向物质结合的碱性磷酸酶标记物，相应底物，含抑制内源性碱性磷酸酶的抑制剂、在与上述靶向物质结合的碱性磷酸酶和底物反应时添加的辅助试剂液。免疫测定用试剂盒，包括经抗原抗体反应与待测物质结合的第一结合物，固定含第一结合物和待测物质的复合物的固相，与复合物中待测物质结合的碱性磷酸酶标记物，含有碱性磷酸酶相应底物的底物液；含有抑制内源性碱性磷酸酶的抑制剂、在与复合物中待测物质结合的碱性磷酸酶标记物的碱性磷酸酶和底物反应时添加的辅助试剂液。免疫测定的方法，包括固定步骤在固相上形成一种复合物；反应步骤让碱性磷酸酶与相应底物反应；测定步骤检测产物。
碱性磷酸酶标记试剂盒免疫测定方法

[发明专利]一种热稳定的碱性磷酸酶抗体偶联物的制备方法-CN202110259373.0在审
发明人：高玉舟;李海超;乔善鹏;何欣;刘珍妮 -专利权人：济南国科医工科技发展有限公司
申请日： 2021-03-10 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： C08G63/91 文献下载
摘要：本发明公开了一种热稳定的碱性磷酸酶抗体偶联物的制备方法，以聚谷氨酸(PGA)、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、以及半胱胺S‑磷酸盐为原料合成PGA(SPO再用该交联剂处理碱性磷酸酶，最后聚合物交联碱性磷酸酶通过STMCC与抗体偶联得到聚合物交联碱性磷酸酶抗体偶联物。本发明通过交联反应提升碱性磷酸酶的稳定性，与使用非交联的碱性磷酸酶相比，本发明制备的聚合物交联碱性磷酸酶抗体偶联物尺寸更小且热稳定性更强。聚合物交联碱性磷酸酶抗体偶联物保留其天然催化活性的75‑90％，聚合物交联碱性磷酸酶抗体偶联物的酶活性比未交联的对照组偶联物高1倍左右。
一种稳定碱性磷酸酶抗体偶联物制备方法

[发明专利]碱性磷酸酶制剂及其用途-CN202080053704.9在审
发明人： M·卡拉科;R·斯泰普尔顿;A·布里斯托尔;S·休伯特;C·弗莱雷 -专利权人：合成生物制品有限公司
申请日： 2020-06-03 - 公布日： 2022-03-22 - 主分类号： A61K9/16 文献下载
摘要：本发明部分地提供包含碱性磷酸酶的制剂。特别地，提供了包含碱性磷酸酶的改良的释放制剂，其在肠中释放大量碱性磷酸酶。还提供了碱性磷酸酶制剂的治疗用途。
碱性磷酸酶制剂及其用途

[发明专利]一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及其应用-CN201911157347.6在审
发明人：李子樵;张辰欢 -专利权人：蓝怡科技集团股份有限公司;浙江蓝怡医药有限公司
申请日： 2019-11-22 - 公布日： 2020-02-21 - 主分类号： G01N33/535 文献下载
摘要：本发明涉及一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及其应用。所述稀释液包括缓冲液、蛋白质、表面活性剂、锌离子、镁离子、防腐剂和添加剂；所述添加剂包括阻断剂和/或碱性磷酸酶；所述碱性磷酸酶为低活性碱性磷酸酶和/或无活性碱性磷酸酶。本发明创造性地在传统的用于稀释碱性磷酸酶标记物的稀释液中添加阻断剂和/或碱性磷酸酶，能够很好地降低非特异性反应，最终降低临床样本检测假阳性结果概率，提高检测分析结果的准确率。
一种碱性磷酸酶标记稀释液及其应用

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