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[发明专利]一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法-CN202010555676.2在审
发明人：何牧仁 -专利权人：草原和牛投资有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2020-08-28 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了一种牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的培养液以及培养方法，属于牛体外胚胎的培养技术领域；所述牛体外胚胎的培养液，包括胚胎基础培养液和瘦素；所述瘦素在培养液中的浓度为1～80ng/ml。本发明所述培养方法，包括以下步骤：1细胞到8细胞期的牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎置于所述的胚胎培养液中，在38.5℃，0.5％CO2、100％湿度条件下进行体外培养所述培养液和培养方法能够显著提高牛体外受精胚胎或牛克隆胚胎的囊胚发育率及胚胎质量，缩短囊胚形成时间，从而大大提高了体外受精和克隆技术效率，进而明显降低胚胎制作成本；所述瘦素可在1细胞到8细胞期间的任何时期添加于基础培养液
种牛体外受精胚胎克隆培养液以及培养方法

[实用新型]一种牛胚胎移植组件用保温套-CN202221817290.5有效
发明人：王藤皓;孙岩;李世彬 -专利权人：新疆新诺生物科技有限责任公司
申请日： 2022-07-14 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： A61D19/04 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种牛胚胎移植组件用保温套，属于牛胚胎移植技术领域。本实用新型包括若干胚胎移植针，以及外壳，所述外壳顶部中心固定连接内胆的外壁，内胆延入到外壳内部，内胆和外壳之间设置气腔，气腔内通过充气管头填充低温液氮，充气管头管道连接在外壳上侧，内胆顶部活动连接封顶帽，内胆内部滑动连接有活动卡盘，活动卡盘上匀布开设若干插孔，插孔内插入放置胚胎移植针，插孔设有用于将胚胎移植针稳定锁定在插孔内的锁紧件。通过本实用新型设计的一种牛胚胎移植组件用保温套，能够利用液氮对牛胚胎进行有效的低温保存，保持牛胚胎的活性，同时能够进行多组牛胚胎移植的同步保温，使用更加方便，在牛胚胎移植技术领域有可利用价值。
种牛胚胎移植组件保温

[发明专利]一种通过诱导表达zfp57提高牛体细胞克隆效率的方法-CN201910307633.X有效
发明人：苏建民;张涌;张成图;孙洪政;陈永忠;孟茹;安全利;程宇尧;王勇胜;权富生 -专利权人：西北农林科技大学;西宁市畜牧兽医站
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据
一种通过诱导表达 zfp57 提高体细胞克隆效率方法

[发明专利]一种提高牛胚胎干细胞多能性的方法-CN202010399402.9有效
发明人：李雪玲;李琛;韩雪洁;相金柱;岳永莉 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2020-05-12 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明提供一种提高牛胚胎干细胞多能性的方法，包括向牛胚胎干细胞体外培养体系中添加终浓度为10‑40μg/mL的抗肿瘤药物naringenin进行维持培养。通过多能性检测，结果表明naringenin可显著增强牛胚胎干细胞多能因子的表达，同时naringenin可促进牛胚胎干细胞系原有的多种表观形态趋向均一。本发明提供的应用抗肿瘤药物naringenin体外培养牛胚胎干细胞多能性的方法，为转基因克隆牛的研究与生产提供了可用于基因转染和体外长期培养筛选的牛胚胎干细胞，并可用于进一步地牛胚胎干细胞相关研究。
一种提高胚胎干细胞多能方法

[发明专利]牛克隆胚胎冷冻液、解冻液、试剂盒、牛克隆胚胎冷冻及解冻方法-CN202010554671.8在审
发明人：何牧仁 -专利权人：草原和牛投资有限公司
申请日： 2020-06-17 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供了牛克隆胚胎冷冻液、解冻液、试剂盒和牛克隆胚胎冷冻及解冻方法，属于体外胚胎冷冻技术，所述冷冻方法如下：将牛克隆胚胎置于基础液中在24～25℃平衡胚胎5～10min后；依次置于第一玻璃化冷冻液中在24～25℃平衡胚胎4～6min、第二玻璃化冷冻液中在24～25℃平衡胚胎4～6min、第三玻璃化冷冻液中在24～25℃平衡胚胎35～45s，最后置于液氮中冷冻。将冷冻的牛克隆胚胎置于第一解冻液中在37～39℃解冻胚胎50～70s后，置于第二解冻液中在24～25℃平衡胚胎4～6min，最后置于基础液中在24～25℃平衡胚胎4～6min。利用本发明所述方法，牛克隆胚胎的受胎率高达25％。
克隆胚胎冷冻解冻试剂盒方法

[发明专利]用于牛体外胚胎生产的高效玻璃化冷冻方法-CN202210101366.2有效
发明人：赵学明;徐茜 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明提供一种用于牛体外胚胎生产的高效玻璃化冷冻方法。本发明首次将β‑烟酰胺单核苷酸应用于牛体外胚胎生产中的牛IVF胚胎玻璃化冷冻技术中，通过在牛卵母细胞体外成熟液和牛体外受精胚胎培养液中添加一定浓度的β‑烟酰胺单核苷酸，然后将牛体外胚胎进行玻璃化冷冻，能够极大地提高牛IVF胚胎的玻璃化冷冻效率。进一步向牛卵母细胞体外成熟液和牛体外受精胚胎培养液中按比例添加生长因子和缝隙链接蛋白可进一步提高玻璃化冷冻效率。更进一步地，通过向玻璃化冷冻液中添加一定浓度的纳米颗粒可有助于进一步提高玻璃化冷冻效率。
用于体外胚胎生产高效玻璃化冷冻方法

[实用新型]牛胚胎生产和移植用的多功能车-CN202023262742.1有效
发明人：赵明礼;王小武;王娜;韩勇权;郭春明;许晓椿 -专利权人：天津博裕力牧科技有限公司
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： B60P3/00 文献下载
摘要：本申请涉及一种牛胚胎生产和移植用的多功能车，包括车头、封闭式车厢、太阳能电池板、母子门，车厢内部通过第一推拉门和第二推拉门隔离成后部更衣区和前部无菌操作区，无菌操作区用于牛胚胎移植无菌操作的作业；更衣区右侧设置衣帽柜本申请的多功能车可以用来进行体内胚胎生产时捡胚、胚胎冻存；体外胚胎生产时捡卵、体外受精、胚胎培养、胚胎冻存；胚胎移植时胚胎解冻复苏等环节。本申请牛胚胎移植用多功能车通过车厢内部的科学设计，解决了牛活体采卵、体内胚胎生产及胚胎移植受牛场场地限制而无法开展等问题。
胚胎生产移植多功能

[发明专利]一种提高牛体外胚胎培养效率和质量的培养液及方法-CN202010610067.2有效
发明人：苏广华;李光鹏;杨磊;吴珊珊;王丽娜 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2020-06-29 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高牛体外胚胎培养效率和质量的培养液及方法，属于家畜胚胎工程技术领域。提高牛体外胚胎培养效率和质量的培养液为在SOF培养液的基础上添加体积分数5‑10％的胎牛血清，并且添加如下微量元素：五水硫酸铜，七水硫酸锌，亚硒酸钠，一水硫酸锰，柠檬酸铁，钼酸铵，偏钒酸铵，六水硫酸镍，使用该培养液进行牛体外受精胚胎或牛体细胞核移植胚胎的培养可有效提高牛体外胚胎培养效率和质量。
一种提高体外胚胎培养效率质量培养液方法

[发明专利]一种杂交和牛的培育方法-CN201210369657.6有效
发明人：祝加贝 -专利权人：北京富通华生物科技有限公司
申请日： 2012-09-28 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了一种杂交和牛的培育方法，包括杂交和牛胚胎体外培养和胚胎移植入受体牛子宫内繁育，其中胚胎体外培养方法包括如下步骤：（1）以具有99.9%日本和牛遗传性状的公牛为父系，荷斯坦奶牛为母系，分别提取父系的精液和母系的卵母细胞；（2）在卵母细胞成熟液中培育卵母细胞；（3）将成熟的卵母细胞在体外受精培养液中进行体外受精；（4）将受精卵在胚胎培养液中培养；（5）体外胚胎的玻璃化冷冻。将体外培养的胚胎移植入受体牛子宫内，采用子宫双侧内壁胚胎移植法，最终培育出具有日本和牛和加拿大荷斯坦奶牛性状的杂交子一代和牛新品系，其具有肉用价值高、生产性能好的特点。
一种杂交培育方法

[发明专利]一种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法-CN200910021760.X无效
发明人：华松;张涌;兰杰;刘永刚;宋永利;王勇胜;刘军 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2009-03-31 - 公布日： 2010-10-06 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：一种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法，该培养液包括市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)，还包括激活素A，该激活素A的浓度是20～80ng/mL；其培养方法是用常规条件培养牛体细胞颗粒细胞单层3天，从第4天开始，向市售牛体细胞克隆胚胎输卵管培养液(mSOF)加入浓度为20～80ng/mL的激活素A，得到牛体细胞克隆胚胎培养液，再用该牛体细胞克隆胚胎培养液5天既得牛体细胞克隆胚胎。本发明提高了胚胎的8/16细胞率、囊胚率、孵化率，使得Na/K-ATPase、Glut-1、ActR II、Smad2等基因表达水平显著提高。特别适用于牛体细胞克隆领域的应用。
种牛体细胞克隆胚胎培养液及其培养方法

[发明专利]牛胚胎性别的无创伤性鉴定分子检测方法-CN200910030256.6无效
发明人：王根林;程凯宁;崔群维 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2009-03-24 - 公布日： 2009-08-26 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学及畜牧业领域，公开了牛胚胎性别的无创伤性鉴定分子检测方法。该方法通过妊娠牛血样抽提DNA模板，以牛Y染色体特异性序列设计两对巢式引物，进行巢式PCR，通过扩增产物是否出现阳性条带判断牛胚胎的性别。该方法实现牛胚胎的性别诊断，避免对胚胎的损害，以保证胚胎的正常发育和生长，为母牛胚胎性别鉴定提供了一条准确、简洁、快速的新方法，并为牛性别控制和胎儿伴性遗传性疾病的诊断与控制提供了一种手段。
胚胎性别创伤鉴定分子检测方法

[发明专利]耐热性牛体外胚胎生产方法-CN202211649289.0在审
发明人：赵学明;张航 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2022-12-20 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了耐热性牛体外胚胎生产方法，本发明通过在牛卵母细胞体外成熟液(IVM)、体外胚胎培养(IVC)过程中，添加IGF1、CoQ10、MT、NMN等，生产出耐热性好的牛体外胚胎，为提高夏季牛繁殖力提供方法
耐热性体外胚胎生产方法

[发明专利]一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法-CN201810187279.7在审
发明人：张涌;刘鑫;张景程;高元鹏;邢徐鹏;周川 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2018-03-07 - 公布日： 2018-08-17 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体及方法。本发明提供的载体包括含有牛KDM4E基因的体外转录模板载体。载体经体外转录反应可获得大量牛KDM4E基因的mRNA，再将其注入到成功融合并激活的牛体细胞克隆胚胎中，使胚胎过量表达牛KDM4E蛋白。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚胎在合子激活时期的组蛋白H3K9me3和H3K9me2表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可用以高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高
牛体细胞组蛋白甲基化水平克隆胚胎克隆修饰体细胞克隆胚胎激活体外转录反应过量表达模板载体胚胎移植体外转录遗传修饰基因高效体合子可用囊胚胚胎蛋白发育融合成功生产

[发明专利]牛体外受精胚胎培养的方法和使用的培养液-CN201710437449.8有效
发明人：许晓椿;王小武;郭晶;赵明礼 -专利权人：天津博裕力牧科技有限公司
申请日： 2017-06-09 - 公布日： 2020-01-21 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明涉及牛体外受精胚胎培养的方法和使用的培养液。具体地说，本发明一方面涉及一种培养牛体外受精胚胎的方法，该方法包括如下步骤：将牛体外受精胚胎置于牛体外受精胚胎培养液中，在38.5℃、0.5％CO2、100％湿度条件下进行胚胎体外培养。本发明还涉及一种牛体外受精胚胎培养液，该培养液包含：NaCl、KCl、NaHCO3、MgCl2、KH2PO3、丙酮酸钠、葡萄糖、半乳糖酸钙、胎牛血清、L‑谷氨酰胺、必需氨基酸、非必须氨基酸、谷胱甘肽和水本发明方法和使用的培养液呈现如说明书所述优异的技术效果，例如本发明方法在对牛体外受精胚胎进行培养时呈现显著更高的囊胚孵化率。
培养液受精胚胎牛体胚胎体外培养体外受精胚胎葡萄糖必需氨基酸丙酮酸钠谷氨酰胺谷胱甘肽技术效果囊胚孵化湿度条件胎牛血清半乳糖氨基酸酸钙

[发明专利]双半胚移植提高牛移植妊娠率的方法-CN201019114017.9无效
发明人：余文莉;李树静 -专利权人：余文莉;李树静
申请日： 2010-02-03 - 公布日： 2010-07-28 - 主分类号： A61D19/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种双半胚移植提高牛移植妊娠率的方法，涉及家畜繁殖学领域，属于胚胎生物技术范畴，作为提高牛繁殖力的辅助技术。本方法将胚胎分割后，将一对半胚移植到一头黄体合格受体母牛中。该方法显著提升了胚胎和受体牛的妊娠率，可显著提高牛胚胎移植技术的经济效益。
双半胚移植提高妊娠率方法

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