本发明涉及生物技术检测领域,目的是提供一种高灵敏度,可信度和直观的人乳头瘤病毒原位杂交检测试剂盒及其方法。本发明一个技术方案为提供一种人乳头瘤病毒原位杂交检测试剂盒,所述试剂盒包括玻片、杂交液、原位杂交试剂,所述杂交液包括标记物标记的杂交探针,所述杂交探针序列如SEQ ID NO:9到SEQ ID NO:12本发明的有益效果为本发明通过对玻片的特殊处理,解决了原位杂交检测样本必须为石蜡切片或冰冻切片的局限性,在原位杂交检测过程中,引入了杂交增强液及显色增效液,提高了检测结果的信噪比,结果易于判读。