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[发明专利]一种双基因缺失肠炎沙门氏菌、其构建方法及含有该双基因缺失肠炎沙门氏菌的疫苗-CN201610626518.5有效
发明人：胡勇;林治华;舒茂;王远强;邱荣蓉;廖羚茜 -专利权人：重庆理工大学
申请日： 2016-08-02 - 公布日： 2019-10-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开一种双基因缺失肠炎沙门氏菌、其构建方法及含有该双基因缺失肠炎沙门氏菌的疫苗，所述双基因缺失肠炎沙门氏菌为rfaH基因和sopB基因都被敲除的肠炎沙门氏菌，所述构建方法采用同源重组方法和蔗糖敏感基因的负筛选方法对所述肠炎沙门氏菌中的rfaH基因和sopB基因进行敲除，所述疫苗的组分包括采用上述方法制得的双基因缺失肠炎沙门氏菌。本发明双基因缺失肠炎沙门氏菌细胞免疫和黏膜免疫得到增强，攻毒保护效果好，免疫效果优良，且在宿主中清除效果好，在体内3~4周内就可以被定殖清除去，安全性能优异。
一种基因缺失肠炎沙门氏菌构建方法含有疫苗

[发明专利]鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗-CN201710306877.7有效
发明人：于圣青;王少辉;杨登辉;吴晓君;丁铲 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所
申请日： 2017-05-04 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了一种鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株及其制备的弱毒疫苗，其中的鼠伤寒沙门菌aroA和luxS双基因缺失株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC该缺失株利用Red同源重组方法缺失aroA和luxS两个基因得到，所以毒力得到显著降低，制备得到的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗免疫保持良好，所以可以用于制备防治鼠伤寒沙门菌感染的鼠伤寒沙门菌双基因缺失弱毒疫苗
伤寒沙门 aroa luxs 基因缺失及其制备疫苗

[发明专利]双基因缺失的副猪嗜血杆菌及其构建方法-CN201310518321.6有效
发明人：贾爱卿;王贵平 -专利权人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司
申请日： 2013-10-28 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种双基因缺失的副猪嗜血杆菌，其是菌株的aroA基因缺失第394131-394631位核苷酸和omp2基因缺失181258-181643位核苷酸的双基因缺失株，菌株保藏号为：CCTCC NO本发明主要是利用现代基因工程原理和分子生物学手段对Hps潜在的毒力因子aroA基因和omp2基因进行缺失，构建Hps不含抗性标记的双基因缺失菌株，并对其生物学特性及致病力等进行探讨，为进一步研制新型高效可提供高交叉保护效力的基因工程活疫苗打下基础
基因缺失嗜血杆菌及其构建方法

[发明专利]一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型双基因缺失突变株的疫苗及应用-CN200710051389.2有效
发明人：贝为成;陈焕春;林丽雯;刘金林;周锐;金梅林;何启盖;方六荣;吴斌;肖少波;郭爱珍;曹胜波 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2007-01-26 - 公布日： 2007-09-19 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明属于动物细菌基因工程技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型双基因缺失突变菌株的构建、疫苗制备及应用。本发明得到一株不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型双基因缺失突变菌株Actinobacillus pleuropneumoniaeAPP－1－mut01(保藏号为CCTCC NO；M207005)。该菌株缺失了猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型两个主要毒力基因激活因子apxIC和apxIIC，产生没有毒力的毒素蛋白ApxIA和ApxIIA，但这两个毒素蛋白仍然具有免疫原性。本发明还公开了利用该双基因缺失菌株制备猪传染性胸膜肺炎双基因缺失疫苗及其应用。本发明制备的双基因缺失疫苗可以刺激猪产生抵抗猪胸膜肺炎放线杆菌同源和异源血清型野毒株的保护性免疫反应，有效防止猪胸膜肺炎放线杆菌的感染。
一种抗性标记胸膜肺炎放线杆菌血清基因缺失突变疫苗应用

[发明专利]一种弓形虫双基因缺失虫株及其构建方法与应用-CN202010106665.6在审
发明人：刘群;张恒;刘晶;乌艺晗 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2020-02-21 - 公布日： 2020-05-15 - 主分类号： C12N1/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种弓形虫双基因缺失虫株的构建方法及其在作为弱毒疫苗中的应用。该弓形虫双基因缺失虫株是在弓形虫RHΔKu80虫株的基础上，利用CRISPR/Cas9基因敲除技术，同时敲除弓形虫虫株中的DNA损伤诱导蛋白1基因(ddi1)和紫外剪切修复蛋白23基因(rad23)两个基因，获得ΔΔddi1rad23双基因缺失虫株。通过实验证明：ΔΔddi1rad23双基因缺失虫株的生长繁殖能力和毒力明显降低，使用该虫株免疫小鼠后再次攻击强毒株能够对小鼠提供较好的保护，可有效抵抗弓形虫再次感染。本发明的弓形虫双基因缺失虫株有作为弓形虫弱毒活疫苗的潜力，为进一步研制弓形虫弱毒疫苗奠定基础。
一种弓形虫基因缺失及其构建方法应用

[发明专利]一种猪链球菌2型双基因缺失活疫苗及应用-CN201110122342.7有效
发明人：方六荣;龙田泗;肖少波;谭臣;贝为成;陈焕春 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2011-05-12 - 公布日： 2012-11-14 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：具体涉及一种猪链球菌2型双基因缺失活疫苗的制备及应用。本发明以猪链球菌2型地方分离株SC19为基础，采用同源重组的方法，在缺失了单基因Ece1的基础上，继续缺失另一个Salk/R基因，获得猪链球菌2型ΔEce1/ΔSalk/R双基因缺失株，以该双基因缺失株的菌液和明胶为主要材料制备出猪链球菌2型双基因缺失活疫苗。本发明制备的猪链球菌2型双基因缺失活疫苗中的Salk/R基因缺失后其毒力大幅度下降，安全性高，不存在毒力返强的风险，且免疫原性高，能够保护免疫猪抵抗5×LD50猪链球菌2型强毒菌株的攻击。
种猪链球菌基因缺失疫苗应用

[发明专利]一种肿大细胞病毒vSOCS/vTK双基因敲除株及其制备方法和应用-CN201711355686.6有效
发明人：何建国;郭长军;翁少萍;林易凡 -专利权人：中山大学
申请日： 2017-12-16 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种肿大细胞病毒vSOCS/vTK双基因缺失株及其制备方法和应用，为肿大细胞病毒株缺失vSOCS基因和vTK基因后制成的减毒病毒株。本发明还提供了一种带筛选标记的肿大细胞病毒vSOCS/vTK双基因缺失株及其制备方法和应用，为肿大细胞病毒缺失了vSOCS基因和vTK基因，且在基因缺失的部位通过同源重组分别插入第一筛选标记基因和第二筛选标记基因后制成的减毒病毒株本发明提供的肿大细胞病毒vSOCS/vTK双基因缺失株是一种敲除了vSOCS和vTK致病基因的重组基因工程疫苗，毒力很弱，不会导致被免疫的鱼类发病死亡，采用浸泡免疫即可达到显著的免疫效果，无须注射，应用价值极大
一种肿大细胞病毒 vsocs vtk 基因及其制备方法应用

[发明专利]一株ExPEC双基因缺失株及由其制备的疫苗-CN202011577236.3在审
发明人：诸葛祥凯;戴建君;姜敏;周洲;王忠星 -专利权人：南通大学
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株ExPEC双基因缺失株及由其制备的疫苗，ExPEC双基因缺失株的构建方法为采用Red同源重组方法，对肠道外致病性大肠杆菌强毒菌株DE205B中的relA基因和spoT基因进行敲除，得到肠道外致病性大肠杆菌RelA和SpoT双基因缺失株DE205BΔrelA/spoT，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO:M 2020610。本发明缺失株具有很好的生物安全性和免疫原性，且毒性较弱，可用于制备弱毒疫苗，预防肠道外致病性大肠杆菌感染。本发明ExPEC双基因缺失株制备的弱毒疫苗，针对肠道外致病性大肠杆菌感染具有免疫保护力，攻毒免疫保护效果好。
expec 基因缺失制备疫苗

[发明专利]鸡白痢沙门菌crp-cya双基因缺失株、构建方法及其应用-CN201710983730.1在审
发明人：李忠鹏;崔一;杨广平 -专利权人：河北科星药业有限公司
申请日： 2017-10-20 - 公布日： 2018-05-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种鸡白痢沙门菌crp‑cya双基因缺失株，它为crp基因和cya基因都不表达的鸡白痢沙门菌；本发明还公开了上述鸡白痢沙门菌crp‑cya双基因缺失株的一种构建方法及其在应用。本发明提供的鸡白痢沙门菌crp‑cya双基因缺失株，可以使鸡白痢沙门菌毒性减弱，以治疗鸡白痢沙门菌感染，本发明的双基因缺失株基因涉及合理，不影响整体鸡白痢沙门菌的整体性能本发明适用于制备鸡白痢沙门菌crp‑cya双基因缺失株，并进一步应用于鸡白痢沙门菌活疫苗中。
白痢沙门 crp cya 基因缺失构建方法及其应用

[发明专利]一种猪链球菌Ⅱ型双基因缺失菌株及其应用-CN202310243581.0在审
发明人：唐宇龙;盘艳盈;廖思梦;方丽华;张硕;印遇龙 -专利权人：中国科学院亚热带农业生态研究所
申请日： 2023-03-14 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪链球菌Ⅱ型双基因缺失菌株及其应用。所述猪链球菌Ⅱ型双基因缺失菌株的菌种保藏号为：CCTCC NO：M 2023119，命名为：Streptococcus suis Ⅱ ZJJX081101
种猪链球菌基因缺失菌株及其应用

[发明专利]一种羊传染性脓疱病毒减毒株的制备方法及其应用-CN202210037761.9在审
发明人：赵魁;王帅;何师师;方梓煜;周艳龙;关继羽;陆慧君;吕品;徐梦实;贺文琦;高丰 -专利权人：吉林大学
申请日： 2022-01-13 - 公布日： 2022-04-15 - 主分类号： C12N7/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种羊传染性脓疱病毒减毒株的制备方法，将羊传染性脓疱病毒毒力基因突变失活，所述毒力基因突变为ORFs 120/121双基因突变。缺失ORFs 120/121基因后ORFV的致病性显著降低。本发明通过敲除ORFV‑SY17毒株ORFs 120/121基因获得双基因缺失的羊传染性脓疱病毒减毒株，具备作为制备羊传染性脓疱病基因缺失减毒活疫苗生产毒株的潜在应用价值。缺失的ORFs 120/121基因也可作为标志基因，建立用于ORFV疫苗毒和野毒检测的鉴别诊断方法。
种羊传染性病毒减毒株制备方法及其应用

[发明专利]鸭瘟病毒gE和gI双基因无痕缺失株CHv-BAC-G-ΔgE+ΔgI及其构建方法-CN201811600142.6在审
发明人：汪铭书;刘田;程安春 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2018-12-26 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸭瘟病毒gE和gI双基因无痕缺失株CHv‑BAC‑G‑ΔgE+ΔgI及其构建方法。本发明利用GS1783大肠杆菌菌株及pEPkan‑S质粒，在细菌人工染色体重组鸭瘟病毒拯救系统平台上经两次同源重组缺失鸭瘟病毒gE基因和gI基因，首次完成了无外源碱基残留的鸭瘟病毒双基因无痕缺失株的构建本发明技术方案解决了缺失鸭瘟病毒基因时在缺失位点残留碱基的问题，为准确探究鸭瘟病毒基因功能及减毒活疫苗的构建提供了充分的技术支持。
鸭瘟病毒构建双基因无痕碱基细菌人工染色体大肠杆菌菌株残留减毒活疫苗方案解决基因功能技术支持同源重组拯救系统上经外源位点质粒基因

[发明专利]鸭瘟病毒gE和gI双基因无痕缺失株DPV CHv-ΔgE+ΔgI及其构建方法-CN201811599537.9有效
发明人：程安春;刘田;汪铭书 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2018-12-26 - 公布日： 2022-06-17 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供了一种鸭瘟病毒gE和gI双基因无痕缺失株DPV CHv‑ΔgE+ΔgI及其构建方法。本发明利用GS1783大肠杆菌菌株及pEPkan‑S质粒，在细菌人工染色体重组鸭瘟病毒拯救系统平台上经两次同源重组缺失鸭瘟病毒gE基因和gI基因，再经过细胞内自发同源重组方法缺失MiniF元件，首次完成了无外源碱基和MiniF元件残留的鸭瘟病毒双基因无痕缺失株的构建。本发明技术方案解决了缺失鸭瘟病毒基因时在缺失位点残留碱基的问题并缺失了MiniF元件，为准确探究鸭瘟病毒基因功能及减毒活疫苗的构建提供了充分的技术支持。
瘟病 ge gi 基因缺失 dpv chv 及其构建方法

[发明专利]鸭肠炎病毒gE、gI双基因缺失病毒株的构建及其应用-CN201510837262.8在审
发明人：杨承槐;李俊平;李启红;李岭;曹明慧;孙莹;李慧姣 -专利权人：中国兽医药品监察所
申请日： 2015-11-26 - 公布日： 2016-03-09 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明涉及鸭肠炎病毒gE、gI双基因缺失病毒株的构建及其应用。其中涉及一种gE、gI双基因缺失、绿色荧光蛋白标记的重组鸭肠炎病毒，及其构建方法；本发明构建了缺失gI基因3’端的1068bp、gE基因5’端的510bp以及gI、gE基因间的223bp非编码区、带有GFP标记的重组病毒鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)rDEVΔgEgI-GFP株，制备成活疫苗，预防鸭瘟，可通过检测gE基因抗体，区分自然感染和免疫鸭；还可插入一种动物病原抗原基因，制备基因工程活载体疫苗。
肠炎病毒 ge gi 基因缺失构建及其应用

[发明专利]肠炎沙门菌ryhB-1和sopE双基因缺失株及其作为减毒疫苗候选株的应用-CN202310556506.X在审
发明人：孟霞;张珂;韦骅栩;何梦萍;王亨;夏芃芃;朱国强 -专利权人：扬州大学
申请日： 2023-05-17 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，公开了一种肠炎沙门菌ryhB‑1和sopE双基因缺失株及其作为减毒疫苗的应用，其中的双基因缺失株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221957该缺失株利用λ‑Red同源重组技术，敲除肠炎沙门菌的非编码小RNA RyhB‑1和侵袭相关靶基因sopE，获得双基因缺失的减毒沙门菌。
肠炎沙门 ryhb sope 基因缺失及其作为减毒疫苗候选应用

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