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[发明专利]一种体外培养小鼠次级卵泡的方法-CN202110274259.5在审
发明人：郭映纯;方丛;梁晓燕 -专利权人：中山大学附属第六医院
申请日： 2021-03-15 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及卵泡体外培养技术领域，尤其涉及一种体外培养小鼠次级卵泡的方法。本发明采用纯机械法分离次级卵泡，减少酶解对卵泡结构完整、卵子发育潜能的影响；采用V型底96孔板培养代替凝胶系统的立体支撑功能，明显缩减系统流程，减少低温、酶解损伤，避免凝胶性质改变导致的营养支持不足、卵泡体积扩大受限问题在常规生长培养基中添加神经营养因子4，弥补体外培养系统较体内发育卵泡的不足，改善卵泡发育潜能及卵子质量，提高次级卵泡体外培养系统效率。
一种体外培养小鼠次级卵泡方法

[发明专利]一种体外培养鸡小黄卵泡的方法-CN202211228811.8在审
发明人：龚炎长;程漫漫;郭妍;管振越;梅子;周昊博 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2022-10-09 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外培养鸡小黄卵泡的方法。涉及家禽卵泡体外培养技术领域。包括将筛选后的小黄卵泡转移到PET细胞培养小室上层，并加入预热好的生长培养基，得培养物；将培养物转移到38.5℃，5％CO2的环境下培养。本发明采用PET细胞小室进行体外卵泡培养，进一步模拟体内环境在体外给予卵泡支撑功能；卵泡在38.5℃，5％CO2的培养箱中培养更接近于鸡体内的温度，模拟真实情况；在DMEM培养基中添加活性VD3，调控体外培养系统类固醇的代谢，促进卵泡的增殖和存活。
一种体外培养鸡小黄卵泡方法

[发明专利]一种小鼠腔前卵泡三维培养体系及其建立方法-CN202011415326.2在审
发明人：范海瑞;包文斌;吴圣龙;吴正常;王海飞 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-12-07 - 公布日： 2021-06-04 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明公开了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系及其建立方法，提供了一种用于体外培养小鼠腔前卵泡的试剂组合，该试剂组合包含：藻酸盐溶液、CaCl2凝胶液、卵泡分离液(DM)、卵泡平衡液(MM)、卵泡酶解液(EM)、卵泡生长液(GM)、卵泡成熟液(MM1)和透明质酸酶。采用该试剂组合建立了一种小鼠腔前卵泡三维培养体系，该三维培养体系以藻酸盐凝胶为基质，以藻酸盐与Ca2+形成的凝胶滴为卵泡发育提供立体结构，再通过在不同的培养基质中进行培养，得到发育成熟的卵泡，进一步得到成熟的卵母细胞。
一种小鼠卵泡三维培养体系及其建立方法

[发明专利]一种水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基及体外培养方法-CN202210319329.9在审
发明人：杨素芳;梁菁媛;朱鹏;邓彦飞;石德顺 -专利权人：广西大学
申请日： 2022-03-29 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种水牛卵巢皮质体外培养用激活培养基及体外培养方法，本发明的激活培养基是在体外基础培养基中外加bpv(hopic)，其中所述bpv(hopic)的浓度为150μM。本发明的激活培养基能够显著提高原始卵泡向初级卵泡转变的卵泡数，在体外维持次级卵泡向窦性卵泡的发育趋势。
一种水牛卵巢皮质体外培养激活培养基方法

[发明专利]一种肉鸽小黄卵泡颗粒细胞的分离培养方法-CN202111110870.0在审
发明人：王莹;郭振玉;张弛;杨海明 -专利权人：扬州大学
申请日： 2021-09-23 - 公布日： 2021-11-09 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种肉鸽小黄卵泡颗粒细胞的分离培养方法，该培养方案步骤如下：选择肉鸽，颈部放血处死，75%酒精擦拭消毒取出卵巢，收集4‑6mm卵泡；剥离卵泡外层血管和结蹄组织；固定卵泡后划开，将卵泡膜层翻转，分离出颗粒细胞层，洗净卵黄；Ⅱ型胶原酶消化，过筛，M199培养基清洗后，离心弃上清；加入含胎牛血清的培养基，重悬颗粒细胞，测定细胞密度；接种至细胞培养皿中，置于培养箱中培养，得到肉鸽小黄卵泡颗粒细胞。本发明的方法不仅适用于小黄卵泡颗粒细胞层分离培养也适用于等级卵泡中颗粒细胞的分离培养；获得的颗粒细胞纯度高、细胞形态正常、活性好，培养方法易操作、重复性强。
一种肉鸽卵泡颗粒细胞分离培养方法

[发明专利]一种体外卵泡培养方法-CN201810727872.6在审
发明人：韩晓冬;田洁;朱金玲;吴江 -专利权人：南京大学
申请日： 2018-07-02 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种哺乳动物的体外卵泡培养方法，它包括以下连续操作：从哺乳动物的卵巢中选择合适直径范围内的卵泡，所述卵泡至少包括外层的卵泡膜细胞，中层的卵巢颗粒细胞，以及内层的卵母细胞；将符合以上要求的卵泡在96孔板中培养；培养的第一阶段，即前三天，使用第一培养基，在培养的第二阶段，即第四天，使用第二培养基。培养最终可以得到成熟的卵泡。
卵泡培养基哺乳动物卵巢卵巢颗粒细胞卵泡膜细胞卵母细胞卵泡培养内层体外中层成熟

[发明专利]一种体外培养人次级卵泡的培养液及其应用-CN202211330660.7在审
发明人：郭映纯;方丛;梁晓燕 -专利权人：中山大学附属第六医院
申请日： 2022-10-26 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是涉及一种体外培养人次级卵泡的培养液及其应用。所述体外培养人次级卵泡的培养液含有以下浓度的组分：胎球蛋白0.5～2mg/mL、胰岛素‑转铁蛋白‑硒混合液0.1～1％、血清蛋白替代物5～10％、人神经营养因子4 10～200ng/mL和人重组卵泡刺激素本发明的体外培养人次级卵泡的培养液可提高人次级卵泡体外培养获得的窦卵泡直径及体积，提高其发育水平；还可以提高人次级卵泡体外培养获得卵母细胞的体外成熟率，应用于临床后有望为患者保存更多成熟卵母细胞。
一种体外培养人次卵泡培养液及其应用

[发明专利]体外培养卵泡的方法-CN200610090804.0无效
发明人： R·库特夫林特;J·史密兹 -专利权人： VRIJE布鲁塞尔大学
申请日： 2001-12-11 - 公布日： 2007-02-21 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明涉及体外培养用于生物测定的哺乳动物卵泡的方法，它包括以下连续的步骤：提供了用于体外培养的一种适宜的容器；从哺乳动物的卵巢中选择卵泡，所述的卵泡至少包含卵泡膜细胞或卵泡前膜细胞，粒膜细胞和卵母细胞；可选的第一个培养步骤，在这一步骤中使用附着物抑制无油的第一培养基；第二个培养步骤，这一步骤使用附着物促进无油的第二培养基；以及回收成熟的卵泡。
体外培养卵泡方法

[发明专利]体外培养卵泡的方法-CN01820575.5无效
发明人： R·库特夫林特;J·史密兹 -专利权人： VRIJE布鲁塞尔大学
申请日： 2001-12-11 - 公布日： 2004-03-10 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明涉及体外培养用于生物测定的哺乳动物卵泡的方法，它包括以下连续的步骤：提供了用于体外培养的一种适宜的容器；从哺乳动物的卵巢中选择卵泡，所述的卵泡至少包含卵泡膜细胞或卵泡前膜细胞，粒膜细胞和卵母细胞；可选的第一个培养步骤，在这一步骤中使用附着物抑制无油的第一培养基；第二个培养步骤，这一步骤使用附着物促进无油的第二培养基；以及回收成熟的卵泡。
体外培养卵泡方法

[发明专利]一种提高牛腔前卵泡体外发育的培养基及其应用-CN201110194207.3无效
发明人：李向东;李冬冬;孙婧 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2011-07-12 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高牛腔前卵泡体外发育的培养基及其应用。本发明提供制备促进离体哺乳动物腔前卵泡体外发育的培养基的方法，为将胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤、血清、促卵泡素、促黄体素、雌激素、PTEN抑制剂和α-MEM培养基混合，得到培养基本发明的实验证明，本发明首先从卵巢皮质分离牛腔前卵泡，随后将获取的卵泡在本发明提供的培养基和对照培养基中进行体外培养，观察其直径增长以及卵泡的成腔率，结果发现，本发明提供的培养基培养得到成腔率和直径增长值均高于对照，为进一步挖掘雌性生殖资源提供必要的培养体系。
一种提高牛腔前卵泡体外发育培养基及其应用

[发明专利]小卵泡卵母细胞的体外成熟培养液及其应用-CN201610291108.X有效
发明人：夏国良;张延浩;王超 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2016-05-04 - 公布日： 2021-05-14 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养，具体公开了一种小卵泡卵母细胞的体外成熟培养液，其含有100nM的E2和100ng/mL的CNP/BNP。本发明还提供了所述体外成熟培养液在促进小卵泡卵母细胞体外成熟或抑制小卵泡卵母细胞减数分裂中的应用及一种促进卵母细胞体外成熟的培养方法，具体为：采集动物的卵母细胞，按卵泡直径大小分类：将小卵泡卵母细胞置于前述的体外成熟培养液中进行前成熟培养，培养时间为20h，然后在成熟液内培养46±2h；将大卵泡卵母细胞直接在成熟液中培养46±2h。本发明采用两段体外成熟培养方法，应用CNP/BNP和E2前成熟处理小卵泡卵母细胞，促进核成熟和胞质成熟同步，提高了体外发育能力，能够成为新型的减数分裂抑制药物在畜牧业成产上推广应用。
卵泡细胞体外成熟培养液及其应用

[发明专利]一种提高细胞成活率的鸡小黄卵泡膜细胞的体外培养方法-CN202110755938.4在审
发明人：李春苗;赵振华;贾雪波;黄华云;王钱保;黄正洋;黎寿丰;吴兆林;屠云洁;沈海玉;薛龙岗 -专利权人：江苏省家禽科学研究所
申请日： 2021-07-05 - 公布日： 2021-10-08 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明公开一种提高细胞成活率的鸡小黄卵泡膜细胞的体外培养方法，涉及生物工程技术领域；所述方法具体为：将鸡小黄卵泡的膜层与胶原酶混合进行消化，消化后过滤得到细胞悬液；将获得的细胞悬液离心，获得的沉淀即为鸡小黄卵泡膜细胞；将获得的鸡小黄卵泡膜细胞与细胞培养液混合培养，得到鸡小黄卵泡膜细胞系；利用本发明所述的体外培养方法可以在较短的时间内获得大量的鸡小黄卵泡膜细胞，成活率较高，达到95％以上，保证了鸡小黄卵泡膜细胞后续试验的顺利进行
一种提高细胞成活率鸡小黄卵泡体外培养方法

[发明专利]一种卵母细胞培养液及提高卵母细胞质量的体外培养方法-CN201911231323.0有效
发明人：蔡更元;吴珍芳;李紫聪;招华兴;张宁;郑恩琴;顾婷;杨化强;洪林君;杨杰 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2019-12-05 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明提供了一种卵母细胞培养液，该培养液中含有成熟的卵泡液。成熟的卵泡液相对于未成熟的卵泡液，成熟的卵泡液对卵母细胞体外成熟有积极作用的物质丰度更高，离成熟期越近的卵泡，它的卵泡液越能促进卵母细胞IVM，并改善其质量。使用体内成熟卵泡液作为卵母细胞体外成熟培养液的组分能有效提高卵母细胞的质量，并且能降低卵母细胞中的ROS含量。由此。不仅可以用来改善各种物种(如：牛、羊等)的卵母细胞体外成熟，提高制备优质的体外受精胚胎及克隆胚胎的生产率，还可供人类辅助生殖中卵母细胞体外培养成熟的运用提供参考，以改进现有的卵母细胞体外成熟的培养体系，
一种细胞培养液提高质量体外培养方法

[发明专利]一种建立卵泡囊肿的颗粒细胞体外模型的方法-CN202210000606.X有效
发明人：秦玉圣;刘彦;白佳桦;许晓玲;冯涛;宋玉清;肖霖力 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2022-01-04 - 公布日： 2022-04-05 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种建立卵泡囊肿的颗粒细胞体外模型的方法。通过在体外培养颗粒细胞液中添加皮质醇刺激使颗粒细胞表达自发性卵泡囊肿颗粒细胞的相关标志分子，建立囊肿卵泡的颗粒细胞体外培养模型。该方法可用于体外研究卵泡囊肿形成的分子机制或针对卵泡囊肿疾病开发相关药物。
一种建立卵泡囊肿颗粒细胞体外模型方法

[发明专利]虾青素在促进小鼠腔前卵泡发育中的应用及制剂-CN202111449416.8有效
发明人：潘晓燕;刘丽梅;李亚秋;刘思彤;徐妲;冯磊;张万生;王雪楠 -专利权人：吉林医药学院
申请日： 2021-11-30 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明涉及虾青素的应用，具体涉及虾青素在促进小鼠腔前卵泡发育中的应用及制剂。本发明通过在小鼠腔前卵泡体外培养液中添加虾青素，以探索其在卵泡发育过程中的抗氧化作用和抗氧化机制，结果显示，虾青素通过提高卵泡中抗氧化基因的表达，减少了卵泡中的脂质过氧化，提高了卵泡的发育率和对雌激素的分泌，促进了小鼠腔前卵泡的体外发育，该结果为其在其他物种卵泡体外培养中的应用提供借鉴。
虾青素促进小鼠卵泡发育中的应用制剂

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