本发明公开了一种索玛鲁肽主肽链及其制备方法,本发明的一种索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白,所述索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白为前导肽‑DDDDK‑GLP‑1(9‑37),所述索玛鲁肽中间体多肽的重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示;在索玛鲁肽中间体制备中,可采用如下前导肽:(1)MFLKGDGYVQGIINFEGLHHLVALGLV;(2)KSI;(3)TrxA;(4)DsbA、(5)DsbC;(6)Sumo本发明制备的索玛鲁肽中间体多肽纯度高,达到89%以上,收率大于82%,本发明采用离子交换分离纯化,分离度高,纯化效果好,杂质少,操作简单。
本发明公开了一种含有新型前导肽的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在毕赤酵母中的表达。含有新型前导肽的米黑根毛霉脂肪酶基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过前导肽的改变实现了米黑根毛霉脂肪酶酶活和酶产量的提高,其酶活是野生型米黑根毛霉脂肪酶前导肽存在下的3倍,摇瓶发酵水平达到100U/ml,这在米黑根毛霉脂肪酶的研究领域还属于首次。
所述骆驼凝乳酶原突变蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1‑4所示,其编码基因的核苷酸序列分别为SEQ ID No.5‑8所示。本发明在骆驼凝乳酶原的自切割前导肽区域设计并分别突变四个氨基酸位点产生四个N‑糖基化保守序列,分别将其进行分泌表达时,突变点的区域分别形成一个N‑糖基化保守位点,使重组骆驼凝乳酶原的分泌表达水平显著提高,同时这些位点突变并不影响前导肽的自切割活性,且突变位点不在成熟蛋白上,因此不影响凝乳酶的凝乳活性。