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[发明专利]间充质干细胞传代培养方法-CN202011071841.3在审
发明人：程蕊苹;高迎凤;蒲锋星 -专利权人：广东芙金干细胞再生医学有限公司
申请日： 2020-10-09 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种间充质干细胞传代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）配制无血清传代培养基，所述无血清传代培养基的组分为：α‑MEM培养基、血小板衍生因子、成纤维细胞生长因子和抗坏血酸；所述血小板衍生因子的浓度为10‑15ng/mL；所述成纤维细胞生长因子的浓度为10‑15ng/mL；2）取原代间充质干细胞，加入到T‑75有孔培养瓶中，加入所述无血清传代培养基，在37℃、5％CO2培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80%‑90%时，用胰蛋白酶‑EDTA溶液进行消化，消化完成后按1:4‑5进行传代培养。
间充质干细胞传代培养方法

[发明专利]非基质胶依赖性的间充质干细胞的制备和扩增方法-CN202310370285.7在审
发明人：赵建芝;张奇辉;陈肇龙 -专利权人：杭州瑞普晨创科技有限公司
申请日： 2023-04-07 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种非基质胶依赖性的间充质干细胞的制备和扩增方法，包括以下步骤：(1)培养增殖诱导多能干细胞，得到培养后的诱导多能干细胞；(2)将培养后的诱导多能干细胞更换成MSC诱导培养基，进行诱导培养，诱导培养14天后，转移至无基质胶的培养板上，进行传代培养，传代培养所用的培养基和MSC诱导培养基相同，传至第三代开始出现间充质干细胞，多次传代扩增，检测合格，即获得间充质干细胞。本发明采用了新的诱导培养基和传代培养基，iPSC诱导的MSC在传代培养时无需基质胶，细胞增殖能力快，活力高，贴壁情况良好，不依赖于基质胶的存在，而且没有外来动物源成分，有利于产品的商业化以及大批量生产应用
基质依赖性间充质干细胞制备扩增方法

[发明专利]一种绵羊精原干细胞分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法-CN201410265999.2有效
发明人：吴应积;罗奋华;张岩;刘林洪;萨初拉 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2014-06-16 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种绵羊精原干细胞的分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法，包括制备各种溶液，然后从3-4月龄的绵羊睾丸中取2-3g曲细精管组织块，经过两步酶解消化制备单细胞悬液，进而用差别贴壁法分离纯化精原干细胞，使用SSCM培养液实现绵羊精原干细胞的传代长期培养，对传代长期培养的绵羊精原干细胞进行冻存和复苏的方法。本发明提供的技术方案实现了不需使用特定的绵羊精原干细胞抗体就能获得纯度较高的绵羊精原干细胞，建立了绵羊精原干细胞传代长期培养体系、成功地建立了液氮冷冻法长期保存绵羊精原干细胞的方法。使用本发明提供的方法分离纯化并且传代的绵羊精原干细胞至少已经培养达40代以上，如果加上冻存时间，最长的培养期已达4年。
一种绵羊干细胞分离纯化传代长期培养复苏方法

[发明专利]一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法-CN201210141452.2有效
发明人：于萍萍;王贵华;侯艳红 -专利权人：北京大北农科技集团股份有限公司;福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-05-08 - 公布日： 2012-09-12 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法，包括如下步骤：1)制备单层传代细胞；2)制备猪传染性胃肠炎病毒生产用种毒；3)将步骤1)制备的单层传代细胞制备成细胞悬液，接种到生物反应器内，使传代细胞在生物反应器中的微载体上吸附培养；4)当传代细胞长至微载体的80％-90％，空球率低于5％，满球率大于80％，细胞计数达到3-5×106个/mL以上时，以2-5％的接种量接种步骤2)制备的种毒，进行病毒的吸附培养；4)当微载体上的传代细胞
一种利用生物反应器生产传染性胃肠炎病毒方法

[发明专利]一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途-CN201610674306.4有效
发明人：王光祥;张志东;尚佑军;刘湘涛;王艳华;吴锦艳;陈妍;张克山;田宏;尹双辉 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2016-08-16 - 公布日： 2020-05-22 - 主分类号： A61K39/295 文献下载
摘要：本发明的一种绵羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗，其有效成分为本发明发明人自行分离且经传代致弱培养后获得的绵羊痘病毒、羊传染性脓疱病毒细胞传代致弱毒或其传代毒，其中绵羊痘病毒细胞传代致弱毒为SheeppoxVirus GS‑WW 2010 F44株，保藏编号为CCTCC NO：V201504；羊口疮病毒(羊传染性脓疱病毒)细胞传代致弱毒为Orf Virus HB‑TS09F65株，保藏编号为CCTCC NO
一种绵羊口疮二联细胞疫苗及其制备方法用途

[发明专利]伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用-CN201910759551.9有效
发明人：王继春;陈赛赛;郭容利;乔永峰;王志胜;许梦微;郑亚婷;刘娅梅;张传健;吕家轩 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-08-16 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供伪狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用，属于动物医学的疫苗领域。该伪狂犬病病毒传代致弱毒株，是伪狂犬病病毒LA2017株，保藏编号为CGMCC No.18170。本发明还提供所述伪狂犬病病毒传代致弱毒株在制备伪狂犬病疫苗中的应用以及以所述伪狂犬病病毒传代致弱毒株为活性成分的疫苗。LA2017株是自然缺失弱毒株，毒力显著降低，接种初生仔猪无不良反应，由于该毒株是采用传代致弱方法获得，因此生物安全风险较低。
狂犬病病毒传代致弱毒株及其应用

[发明专利]一种人脐带间充质干细胞的分离及血清梯度切换培养方法-CN201110444748.7无效
发明人：李力;肖扬 -专利权人：肖扬
申请日： 2011-12-26 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：它是取人脐带用胶原酶II消化，直至Wharton胶全部消化，然后收集消化下来的单细胞，将单细胞接入α-MEM培养基中悬浮培养，直至细胞达到80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化；将胰蛋白酶消化的细胞悬液传代接种于α-MEM培养基中悬浮培养，直至细胞达到80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化，再传代接种于α-MEM培养基中悬浮培养，如此重复进行传代培养，本步骤中的传代培养的α-MEM培养基中的胎牛血清的浓度是随传代次数的增加而递减直至无胎牛血清
一种脐带间充质干细胞分离血清梯度切换培养方法

[发明专利]一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法-CN201911099193.X在审
发明人：冷毅斌;吴亭;尚振波 -专利权人：武汉普诺赛生命科技有限公司
申请日： 2019-11-12 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提出了一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，本发明切取小鼠或大鼠的完整肾脏，用胰蛋白酶和IV型胶原酶联合消化，在完全培养基中培养5‑7d后经免疫荧光鉴定纯度可达95％以上，将分离的成纤维细胞用成纤维专用培养基传代培养本发明提出的一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，取材方便，操作简单，细胞增殖快、得率高、纯度高，是一种理想的小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。
传代培养大鼠小鼠肾成纤维细胞细胞增殖胰蛋白酶成纤维细胞完全培养基专用培养基免疫荧光得率切取肾脏取材纤维细胞消化联合

[发明专利]人胚皮层神经干细胞的原代细胞的分离及传代培养方法-CN201210505244.6无效
发明人：陆华 -专利权人：陆华
申请日： 2012-11-30 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明提出一种神经干细胞单细胞克隆及传代培养方法，其应用于神经干细胞细胞原代细胞的分离培养、单细胞克隆及传代培养的过程，所述分离培养方法包括以下步骤：神经干细胞原代细胞的分离和培养，传代培养及单细胞克隆、传代，克隆诱导分化以及间接免疫荧光检测。
皮层神经干细胞细胞分离传代培养方法

[发明专利]适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系-CN200710112948.6无效
发明人：马立宪;王刚;邵丽华;江渊;王爱华 -专利权人：山东大学齐鲁医院
申请日： 2007-09-19 - 公布日： 2008-04-09 - 主分类号： C12N5/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系及其制备方法，杂交细胞系HepCHLine是由人原代肝细胞和筛选HGPRT阴性的HepG2作为亲本细胞，经融合杂交而得，是一种全新的物质。HepCHLine继承了亲代人肝细胞对HBV感染的敏感性和HepG2能接种动物或传代培养的特性，既能适应HBV的自然感染又能长期传代培养。本发明首次制备出适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系HepCHLine，很好地满足了对人HBV及其自然状态下感染宿主细胞研究的需要。
适应乙肝病毒自然感染复制传代培养杂交细胞系

[实用新型]用于水痘疫苗生产的细胞传代操作系统-CN202120056693.1有效
发明人：朱绍荣;蔡明勇 -专利权人：上海荣盛生物药业有限公司
申请日： 2021-01-11 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：一种用于水痘疫苗生产的细胞传代操作系统，包括用于培养细胞的细胞工厂，放置培养液的第一储罐，放置消化液的第二储罐，放置培养废液的第三储罐、阀体和负压发生装置。本实用新型的用于细胞工厂传代的操作系统，其将细胞传代过程中涉及的各个装置和器件互联，形成一个系统，避免了细胞传代过程中与外界接触，使得细胞被染菌的几率大大下降，提高了生物制品生产过程和产品质量的可控性。
用于水痘疫苗生产细胞传代操作系统

[发明专利]一种细胞的传代培养方法与应用-CN202110529912.8在审
发明人：朱灏;吴丹枫 -专利权人：达瑟儿（上海）生命科技有限公司
申请日： 2021-05-14 - 公布日： 2022-07-19 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于细胞培养技术领域，具体来说，涉及一种细胞的传代培养方法。所述细胞的传代培养方法可培养P1‑P25代人脐带间充质干细胞时均保持增殖能力；步骤包括：(1)离心；(2)清洗；(3)消化；(4)洗涤；(5)收获计数；(6)细胞接种。在本发明选择了特定的培养基和重组酶使得传代培养后的细胞具有良好的形态、较高的增殖能力和存活率。
一种细胞传代培养方法应用

[发明专利]一种维持体外连续传代的间充质干细胞干性的组合物-CN202211739938.6在审
发明人：请求不公布姓名 -专利权人：湖州闪思新材料科技有限公司
申请日： 2022-12-31 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本申请涉及一种维持体外连续传代的间充质干细胞干性的组合物。本申请首次公开Squarrosal和Squarrosol具有维持体外连续传代的间充质干细胞干性的作用，将此两种物质以一定浓度和摩尔比加入到α‑MEM培养基中，用于体外连续传代的间充质干细胞的培养。
一种维持体外连续传代间充质干细胞干性组合

[发明专利]一种用传代细胞系生产猪伪狂犬活疫苗的方法-CN201710437501.X有效
发明人：张毓金;严悌昆;黄淑芬 -专利权人：广州渔跃生物技术有限公司
申请日： 2017-06-09 - 公布日： 2019-09-06 - 主分类号： A61K39/245 文献下载
摘要：本发明属于兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种用传代细胞系生产猪伪狂犬病活疫苗的方法。本发明所用传代细胞系为Vero细胞，通过制苗用细胞的传代与培养、细胞毒种的繁殖、制苗毒液的繁殖及配苗、分装及冻干操作步骤制得。
一种传代细胞系生产狂犬疫苗方法

[发明专利]一种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法-CN201310746312.2无效
发明人：杨灵芝;郭显坡;王朝伟;张静;程小囯 -专利权人：山东滨州博莱威生物技术有限公司
申请日： 2013-12-30 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：该种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法，包括如下步骤：(1)准备传代细胞；(2)测定猪瘟活疫苗在传代细胞中的病毒含量；(3)荧光染色接毒细胞。该方法通过用间接免疫荧光检测活疫苗在传代细胞中病毒，以达到快速准确、简单有效的检测出猪瘟活活疫苗病毒含量的目的。
一种利用间接免疫荧光检测猪瘟疫苗病毒含量方法