本发明公开了促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用,促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的罗伊氏乳杆菌(保藏号:CCTCC M 20211240);促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂的验证方法包括:选取体重为36.58±3.71kg、健康状况相似的“杜长大”三元杂(DLY)公猪分为2个组:对照组Cont(n=8),罗伊氏乳杆菌灌服组Lr(n=8);罗伊氏乳杆菌灌服组为每日上午9:00进行,灌服剂量为实验结果表明,本发明提供的宁乡猪粪便来源罗伊氏乳杆菌可以促进猪脂肪酸在肌肉的沉积。