[发明专利]一种同时结合TGFβ和VEGF的双靶点融合蛋白质粒的构建方法在审
| 申请号： | 202110398534.4 | 申请日： | 2021-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN113388638A | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 储碧心;王晓宇;傅大莉 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军西部战区总医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12N15/62 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 胡昌国 |
| 地址： | 610000 四川省*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种能够表达同时靶向TGFβ和VEGF的融合蛋白的质粒的构建方法，步骤如下：设计并构建了融合蛋白、VEGFR‑1、TβR‑II基因和引物合成，PCR扩增；以pCI/Y2质粒为模板，设计引物，PCR扩增获得Fc基因；将Fc基因片段经重组PCR方法获得TF融合基因片段；对TF融合基因片段进行Nhe I和EcoR I双酶切，质粒pIRESpuro3用同一组酶进行双酶切，将两种酶切片段回收后进行连接反应，得到质粒pIRESpuro3/TF；对构建成功的pIRESpuro3/TF质粒进行BspE I和EcoR I双酶切，同时用同一组酶对已得到的融合基因片段进行双酶切，酶切片段回收后进行连接反应，得到质粒。本发明构建的质粒瞬转细胞后，得到所需融合蛋白，纯化后经鉴定均有良好的活性和亲和力，为后续研究和开发该类药物用于临床肿瘤治疗奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同时 结合 tgf vegf 双靶点 融合 蛋白 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
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