[发明专利]HDAC8基因敲除的BHK-21细胞系及其构建方法和应用有效
申请号: | 202110154123.0 | 申请日: | 2021-02-04 |
公开(公告)号: | CN112980878B | 公开(公告)日: | 2023-03-31 |
发明(设计)人: | 孙跃峰;侯石桐;毛箬青;张会军;殷相平;赵帅阳 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/55;C12N5/10;C12N7/00;C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/02;C12Q1/06;G01N33/569;C12R1/91;C12R1/93 |
代理公司: | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人: | 郭卫芹 |
地址: | 730046 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | 本发明公开了HDAC8基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法,利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC8进行基因敲除,将用于敲除HDAC8的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后,利用抗生素筛选结合梯度稀释,用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序,成功鉴定到了2个HDAC8基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC8敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快,最终病毒滴度有显著提高,且HDAC8敲除后对细胞生长速率无显著影响,说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC8,直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。 | ||
搜索关键词: | hdac8 基因 bhk 21 细胞系 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】:
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