[发明专利]人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料、制备方法及应用在审
申请号: | 201910738488.0 | 申请日: | 2019-08-12 |
公开(公告)号: | CN110606887A | 公开(公告)日: | 2019-12-24 |
发明(设计)人: | 闫亚平;李怡婷;郝文斌;李科 | 申请(专利权)人: | 陕西脉元生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/705 | 分类号: | C07K14/705;C07K1/14;C12N15/861;G01N33/531;G01N33/564 |
代理公司: | 61216 西安恒泰知识产权代理事务所 | 代理人: | 李婷;金艳婷 |
地址: | 710003 陕西省西安*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明公开了人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料、制备方法及应用,本发明将NMDAR抗原包被于载体膜上制成抗NMDAR受体检测材料,人血清和脑脊液中的特异性NMDAR抗体会与抗原结合,利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色,并在显色反应中加入本发明的封闭材料,可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有NMDAR抗体。该方法具有灵敏度高,操作简便,快速检测等优点,有助于抗NMDAR受体脑炎的识别和诊断。 | ||
搜索关键词: | 碱性磷酸酶底物 封闭材料 检测材料 检测样品 抗原包被 抗原结合 快速检测 受体检测 显色反应 自身抗体 脑炎 灵敏度 脑脊液 人体液 人血清 载体膜 抗体 可用 配体 显色 制备 诊断 应用 | ||
【主权项】:
1.人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:/n步骤1,获取NMDAR的CDS序列作为目的基因,将带有酶切位点的目的基因插入pShuttle-cmv质粒载体中,得到重组质粒载体pAdEasy-NMDAR1α;/n步骤2:将重组质粒载体pAdEasy-NMDAR1α转染入293T细胞中,得到腺病毒pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞;/n步骤3:裂解pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞,去除pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞的核蛋白、DNA和胞浆蛋白,再加入复合提取液,4℃静置15~30min后在35~40℃水浴,直至出现分层;/n其中,复合提取液为Triton X100、CHAPS、N-甲基葡糖胺按照体积比为1:1:1的比例混合或洋地黄皂苷、Triton X100、NP40、CHAPS按照体积比1:1~2:1~2:1的比例混合;/n步骤4:取分层后的沉淀,向沉淀中加入溶剂混匀,去除上清液,将所得沉淀固化在载体膜上,得到人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料;/n其中,溶剂为10%PEG的无水乙醇溶液、10%PEG的丙酮溶液或10%PEG的异丙酮溶液。/n
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