[发明专利]一种食品中双歧杆菌的实时荧光PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种食品中双歧杆菌的实时荧光PCR检测方法，涉及双歧杆菌检测领域，包括以下步骤：A：备料，B：提取DNA，C：条件，D：扩增检测。本发明检测方法有很强的抗干扰能力，灵敏度很高，检测稳定，荧光PCR检测方法可快速的检测出食品中是否存在双歧杆菌，可以满足日常检测的要求。

主权项

1.一种食品中双歧杆菌的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A：备料：采用青春双歧杆菌和长双歧杆菌培养物十倍梯度稀释至10⁸CFU/mL‑10CFU/mL，每个浓度样品取1mL备用；B：提取DNA：将不同混合样品，使用DNA提取试剂盒提取DNA，每次DNA提取均设置提取空白对照，用微量分光光度计测定DNA质量浓度后，保存备用；C：条件：以双歧杆菌上游特异性引物FBP：5’‑GTT GGG TTA AGT CCC GCA A‑3’；双歧杆菌下游特异性引物RBP：5’‑TGA AGC CCT GGA CGT AAG G‑3’；双歧杆菌的特异性探针序列BP：5’‑FAM‑ACG TAA GGG GCA TGA TGA TCT GAC G‑BHQ1‑3’，荧光PCR反应体系为252 L；D：扩增检测：用青春双歧杆菌、长双歧杆菌样品DNA为模板以荧光PCR扩增进行灵敏度检测，将不同浓度青春双歧杆菌DNA，分别添加三种重量的大肠杆菌DNA，通过荧光PCR扩增进行抗干扰能力检测。