[发明专利]NK细胞的分离培养及保存入库的方法在审
| 申请号： | 201910373695.0 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110079499A | 公开（公告）日： | 2019-08-02 |
| 发明（设计）人： | 任贺 | 申请（专利权）人： | 青岛大学附属医院 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A01N1/02 |
| 代理公司： | 天津市尚文知识产权代理有限公司 12222 | 代理人： | 刘瑞芳 |
| 地址： | 266000*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供一种NK细胞的分离培养及保存入库的方法，将血站制备血制品过程中滤除掉的白细胞经体外诱导扩增NK细胞，对NK细胞的培养方法进行优化，包括：健康或成年人白细胞的采集、NK细胞的扩增、NK细胞的检测、NK细胞的存储及编码入库、建立可供检索的细胞信息档案。本发明中制备血制品过程中滤除掉的白细胞具有细胞数量大、功能活性强、无传染性病原体污染等特点，为临床使用非自体NK细胞治疗恶性肿瘤性疾病提供丰富的细胞来源，同时实现NK细胞的高效扩增，冻存的NK细胞复苏活力达到86％以上，复苏仅需30‑60分钟，存储时间可达15‑20年，为肿瘤治疗和预防，以及病毒感染产生的免疫系统疾病治疗和预防提供了储存新方式。 | ||
| 搜索关键词： | 白细胞 扩增 分离培养 血制品 入库 除掉 制备 存储 传染性病原体 免疫系统疾病 细胞信息档案 复苏 病毒感染 功能活性 体外诱导 细胞来源 肿瘤治疗 恶性肿瘤 性疾病 保存 冻存 血站 预防 治疗 自体 检索 采集 储存 细胞 检测 污染 优化 健康 | ||
【主权项】：
1.一种NK细胞的分离培养及保存入库的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)白细胞的采集及运输；(2)白细胞的入库；(3)分离单个核细胞；(4)扩增培养，获得NK细胞；(5)NK细胞的冻存，编码入库并上传细胞信息档案；(6)NK细胞检测(7)细胞复苏后存活率、诱导NK等效率(8)出库流程。
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- 用于治疗肿瘤的PD‑1封闭CIK的制备方法,属于医疗领域，抗人CD3单克隆抗体包被细胞培养瓶；激活步骤，利用所述CD3单克隆抗体、IFNγ以及IL‑2激活培养淋巴细胞；清洗步骤，清洗三次激活培养后的所述淋巴细胞；封闭步骤，用生理盐水悬浮所述清洗后的淋巴细胞，得到悬浮细胞溶液，向所述悬浮细胞溶液中加入PD‑1单克隆抗体，混悬孵育；向所述PD‑1单克隆抗体孵育后的细胞悬液补加生理盐水制得回输细胞悬液。本发明方法制备PD‑1封闭的CIK具有PD‑1单克隆抗体的用量少、封闭PD‑1分子的效果好、肿瘤杀伤活性高等特点。同时具备操作简单、制备成本低和便于临床应用的特点。
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- 邢永梅;邓蒙蒙;程箫;刘丹;吴疆;王保如 - 安徽瑞达健康产业有限公司
- 2019-05-16 - 2019-09-24 - C12N5/0783
- 本发明公开了一种细胞组合物在癌细胞NCI‑H1975上的应用，具体涉及γδT细胞和NK细胞组合物在NCI‑H1975上的应用。通过共培养诱导扩增方法获得γδT和NK细胞组合物，混合γδT和NK细胞毒性/活性强，对NCI‑H1975的作用强，几乎可以100％杀伤NCI‑H1975，为NCI‑H1975型癌症及疾病提供治疗方案；简化了在临床中治疗过程，简化了治疗手段，也降低了治疗成本。
- 一种缩短NK细胞培养周期的培养方法-201910542181.3
- 邓蒙蒙;邢永梅;程箫;刘丹;吴疆;王保如 - 安徽瑞达健康产业有限公司
- 2019-06-21 - 2019-09-24 - C12N5/0783
- 本发明公开了一种缩短NK细胞培养周期的培养方法，具体涉及自体或同种异体外周血单个核细胞在体外稳定的、大量扩增高纯度、高细胞毒活性的NK细胞的方法，步骤为：(1)分离单个核细胞；(2)通过免疫分选去除单个核细胞中的CD3+T淋巴细胞；(3)加入NK细胞培养用无血清细胞培养基及扩增组合物IL‑2和生长素，体外培养2‑5天后全换液；(4)NK细胞换液；(5)收获NK细胞。生长素同IL‑2共同刺激NK细胞扩增培养，可以缩短NK细胞的培养周期，间接降低培养成本，且本培养方法不会降低NK细胞的活性、数量和纯度，解决了传统技术方法中的缺陷，同时在较短时间内满足临床对NK细胞的需求。
- 一种干细胞样记忆性T细胞体外诱导剂及方法-201610870886.4
- 张辉;张译文 - 深圳市再生之城生物医药技术有限公司
- 2016-09-30 - 2019-09-20 - C12N5/0783
- 本发明公开了一种干细胞样记忆性T细胞体外诱导剂及方法，发明人通过实验发现可以在T细胞诱导培养基中额外添加组胺H1受体拮抗，可以在体外快速将CD8初始T细胞诱导分化扩增为TSCM细胞，且TSCM细胞占CD8细胞比例上有明显抬高，TSCM细胞的绝对数有显著抬高。诱导分化扩增的TSCM细胞保持了TSCM细胞的特性和功能。组胺H1受体拮抗剂，对人体的安全性早已经过临床实践的检验，避免了新药研发漫长的周期。同时，组胺H1受体拮抗剂作为一种成熟的药物，具有成本低廉、安全性好的优点，加入组胺H1受体拮抗剂诱导分化扩增的TSCM细胞无需进行特别的处理即可用回输，为肿瘤细胞治疗提供了强有力的实践基础，具有重要的开发价值和推广意义。
- 扩大T细胞的方法-201910236594.9
- C·M·鲁尼;A·M·利恩;J·F·维拉;M·V·尼高;R·L·库纳斯 - 细胞药物有限公司;贝勒医学院
- 2012-04-23 - 2019-09-17 - C12N5/0783
- 本公开涉及体外扩大自体或异源抗原特异性T细胞的新方法，包括步骤：a)在存在下列的情况下培养自体PCMB细胞群：i)已用与靶抗原相关的肽/肽混合物脉冲的树突细胞或与靶抗原相关的肽/肽混合物，和ii)至少一种细胞因子，和b)在存在下列的情况下培养来自步骤a)的T细胞群：i)已用与靶抗原相关的肽/肽混合物脉冲的树突细胞，或已用与靶抗原相关的肽/肽混合物脉冲的自体抗原递呈T细胞(T‑APC’s)细胞，和人造共同刺激因子，和ii)任选地，细胞因子，并且其特征在于，所述方法在相关T细胞群扩大中不采用活病毒和/或病毒载体或编码抗原的DNA或RNA或重组靶抗原的使用。本公开还扩展至得自所述方法的细胞群、包括所述细胞群的药物组合物和细胞和组合物的治疗用途，特别是治疗或预防病毒感染和/或癌症，例如，在免疫抑制或免疫活性患者体内。
- 专利分类
