[发明专利]一种基于亚甲基蓝琼脂糖法分离芸薹根肿菌单孢的方法

摘要

本发明提供一种基于亚甲基蓝琼脂糖法分离芸薹根肿菌单孢的方法。包括以下步骤：首先制备浓度为5×103个孢子·mL‑1的芸薹根肿菌休眠孢子悬浮液；将0.01％亚甲基蓝染色液加入1.3％琼脂糖溶液，制备亚甲基蓝琼脂糖载玻片凝层；取2μL芸薹根肿菌休眠孢子悬浮液均匀涂布于凝层表面，在显微镜下观察，确定视野下只有一个孢子时，分离含有单孢的凝层，倒扣于十字花科幼苗根毛处，培育得到芸薹根肿菌单孢系。本发明利用亚甲基蓝琼脂糖法进行芸薹根肿菌单孢分离，背景呈轻微蓝色，且无杂质和气泡，能清晰区分芸薹根肿菌单孢。此方法过程简单、易操作，大大提高了芸薹根肿菌单孢分离效率和准确率。

主权项

1.一种基于亚甲基蓝染色液结合琼脂糖法的芸薹根肿菌单孢分离方法，包括如下步骤：1)将十字花科根肿病发病组织打成匀浆，过滤，弃沉淀，制备芸薹根肿菌孢子悬浮液；2)配制质量体积百分浓度为1.3％‑1.5％的琼脂糖溶液，并灭菌；配制质量体积百分浓度为0.005％‑0.01％的亚甲基蓝染色液；将所述亚甲基蓝染色液与灭菌后的所述琼脂糖溶液按照体积比100μL：30mL的比例混合混匀，得到亚甲基蓝染色液琼脂糖溶液；3)取洁净的载玻片，在步骤2)所述亚甲基蓝染色液琼脂糖溶液中蘸一下，使载玻片表面形成凝层；4)将步骤1)所述的芸薹根肿菌休眠孢子悬浮液均匀涂布于亚甲基蓝染色液琼脂糖凝层表面，在显微镜下观察，确定视野下只有一个孢子时，分离含有该芸薹根肿菌单孢的亚甲基蓝染色液琼脂糖凝层，倒扣于十字花科植物的幼苗根毛处，培育得到芸薹根肿菌单孢系。