[发明专利]一种离体枝条接种对梨火疫病抗病性快速鉴定的方法

摘要

本发明涉及植物保护技术领域，具体公开了一种离体枝条接种对梨火疫病抗病性快速鉴定的方法，其方法包括如下步骤：(1)梨火疫病菌接种液的制备；(2)离体枝条制备；(3)接种；(4)品种抗病性评价。本发明提供的对梨火疫病抗病性的鉴定和评价方法，将发病症状和分子生物学技术定量病原相结合，不仅快速简便、规范实用，结果准确可靠，适合于对大批量材料进行抗并行的快速鉴定和筛选。

主权项

1.一种离体枝条接种对梨火疫病抗病性快速鉴定的方法，其特征在于通过以下步骤实现：（1）梨火疫病菌接种液的制备：将梨火疫病菌经过致病力测定为强致病力的菌株接种于NA+5%蔗糖培养基上，28.5℃培养48h活化，挑取单菌落接种于NA+5%蔗糖培养液中，28.5℃、160 rpm/min振荡培养12h，测定OD₆₀₀值为1.2左右的菌液利用灭菌水稀释至10⁸作为接种液；（2）离体枝条制备：选择待测样品的当年生幼嫩枝条作为供试材料，将供试枝条截至50cm左右的茎段，用75%酒精消毒后，将其1/3插入装有0.5‰NaCl无菌盐水的三角瓶中水培；（3）接种：用灭菌手术刀在枝条3‑4片叶的叶腋处切开一个约5mm²的伤口，用移液枪吸取2mL的梨火疫病原菌接种液滴在一块约2cm²灭菌脱脂棉片上，将棉片贴在伤口部位，再用保鲜膜包裹，每个待测梨或苹果品种（种质）接种30个离体枝条，以无菌水代替菌液作为对照；（4）品种抗病性评价：将接种后的离体枝条置于相对湿度75%，温度28.5℃，12h光照条件的人工气候箱（室）中培养，枝条接种后每天观察发病情况，接种10d后对接种枝条进行病情调查，计算发病率和病情指数，同时结合接种枝条病原菌荧光定量PCR检测结果，根据梨火疫病抗病性等级划分标准，综合评估供试品种的抗病水平。