[发明专利]一种重组表达活性谷氨酰胺转氨酶及其解脂耶氏酵母菌株的构建方法在审
| 申请号： | 201811647904.8 | 申请日： | 2018-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN109609531A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 史百鸣;王运龙;卢雪峰;李国莹;陆瑞琪 | 申请（专利权）人： | 江苏一鸣生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/81;C12N9/10;C12N1/19;C12R1/645 |
| 代理公司： | 苏州国卓知识产权代理有限公司 32331 | 代理人： | 明志会 |
| 地址： | 225432 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，尤其是一种重组表达活性谷氨酰胺转氨酶的制备方法，包括以下步骤；步骤一、在pinA1297质粒上插入胰蛋白酶序列和谷氨酰胺转氨酶酶原序列；步骤二、将步骤一获得的质粒转化解脂耶氏酵母菌株Yarrowia lipolytica polh中；步骤三、将步骤二获得的菌株在YPD培养基中培养、在PPB培养基中发酵，获得谷氨酰胺转氨酶；步骤四、将获取的胰蛋白酶和谷氨酰胺转氨酶酶原分别表达并分泌到细胞外，在胞外蛋白酶切除谷氨酰胺转氨酶酶原的酶原区，获得有活性的谷氨酰胺转氨酶，本发明发酵中不需诱导或添加抗生素，能用于食品和药品的生产，易于培养，发酵方法简单，周期短，重组表达谷氨酰胺转氨酶，不用体外活化，简化谷氨酰胺转氨酶生产工艺，降低生产成本。 | ||
| 搜索关键词： | 谷氨酰胺转氨酶 谷氨酰胺转氨酶酶原 重组表达 胰蛋白酶 发酵 酵母菌株 质粒 生物技术领域 胞外蛋白酶 体外活化 培养基 构建 菌株 酶原 生产工艺 分泌 制备 抗生素 切除 诱导 细胞 化解 生产 | ||
【主权项】：
1.一种重组表达活性谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤；步骤一、在pinA1297质粒上插入胰蛋白酶序列和谷氨酰胺转氨酶酶原序列，获得pinA1297/trypsin‑proTGase质粒；步骤二、将步骤一获得的质粒转化解脂耶氏酵母菌株Yarrowia lipolytica polh中，获得Y. lipolytica Po1h/trypsin‑proTGase菌株；步骤三、将步骤二获得的菌株在YPD培养基中培养、在PPB培养基中发酵，获得谷氨酰胺转氨酶；步骤四、将获取的胰蛋白酶和谷氨酰胺转氨酶酶原分别表达并分泌到细胞外，在胞外蛋白酶切除谷氨酰胺转氨酶酶原的酶原区，获得有活性的谷氨酰胺转氨酶。
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