[发明专利]一种提取植物细胞核的方法

摘要

一种提取植物细胞核的方法，它涉及一种提取细胞核的方法。本发明为了解决现有方法得到的细胞核纯度低的问题。本发明提取植物细胞核的方法为：一、预处理；二、第一次提取；三、细胞核粗提；四、细胞核粗提液的过滤；五、细胞核纯化。本发明方法解决了现有技术提取细胞核纯度低的问题，使用本发明方法提取的细胞核纯度达到了75％以上。

主权项

1.一种提取植物细胞核的方法，其特征在于提取植物细胞核的方法按照以下步骤进行：一、预处理：植物材料去除杂质，洗涤后吸干水分；二、第一次提取：取1～2g步骤一预处理后的材料和4～6g的锆珠放入研磨管中，再向研磨管中加入10mL pH为7.5的buffer A溶液混合后研磨2～4次，离心，分别收集上清和沉淀；其中buffer A溶液中Tris‑HCl浓度为20mM、KCl浓度为10mM、蔗糖浓度为250mM、MgCl2浓度为1.5mM、β‑Mercaptoethanol浓度为5mM、蛋白酶抑制剂浓度为1mM；研磨条件是研磨速度为6.5m/s、每次研磨时间为1min，每次研磨间隔时间为1min；离心条件是离心力为125g、离心时间为7min；三、细胞核粗提：步骤二的沉淀提取5～6次，提取条件为向沉淀中加入8～12mL的buffer A溶液混合研磨、离心，研磨条件是研磨速度为6.5m/s、每次研磨时间为1min；离心条件是离心力为125g、离心时间为7min；收集每次得到的上清液混合，得到细胞核粗提液；四、细胞核粗提液的过滤：步骤一得到的上清液和步骤三得到的细胞核粗提液混合，然后用N层的200目的尼龙网过滤，滤液离心2次，离心温度为4℃、离心力为400g、每次离心时间为10min，收集沉淀；五、细胞核纯化：步骤四中的沉淀用20mL pH为7.5的buffer B溶液重悬合并，洗涤2次，离心收集细胞核即得到植物细胞核；其中buffer B溶液中Tris‑HCl浓度为20mM、KCl浓度为10mM、蔗糖浓度为250mM、MgCl2浓度为1.5mM、蛋白酶抑制剂浓度为1mM、β‑Mercaptoethanol浓度为5mM、Triton x‑100浓度为0.1％，每次洗涤步骤为振荡器震荡30s、冰浴2min，然后在4℃下、离心力为400g、离心10min。