[发明专利]一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺

摘要

一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺，包括如下步骤：A、将北冬虫夏草菌种培养得到种子液；B、种子液固体发酵得到北冬虫夏草子实体；C、北冬虫夏草子实体粉碎得到北冬虫夏草混合液；D、北冬虫夏草混合液提取得到多糖浓缩液；E、多糖浓缩液离心处理得到北冬虫夏草多糖提取物；F、北冬虫夏草多糖提取物脱色得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液；G、北冬虫夏草多糖提取物无色溶液除去蛋白，得到北冬虫夏草粗多糖；H、北冬虫夏草粗多糖进一步纯化得到北冬虫夏草多糖。本发明的提取纯化工艺，实现了培养、提取、纯化连续处理，提取效率高，多糖产率高，操作较简单。

主权项

1.一种基于固体发酵的北冬虫夏草多糖提取纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：A、将北冬虫夏草菌种接种到北冬虫夏草种子培养基上，放进摇床培养箱，培养2.5‑4d，所述北冬虫夏草种子培养基的组成包括以下重量份的原料：蔗糖20‑30份、酵母膏1.5‑3份、磷酸二氢钾0.8‑1.1份硫酸镁0.5‑0.7份、蒸馏水1000份；B、将步骤A得到的种子液，接种到经灭菌处理的北冬虫夏草固体培养基上，接种量为8‑11％，放进恒温恒湿培养箱中，在28.5℃温度条件下，发酵5‑8天，得到北冬虫夏草子实体；所述北冬虫夏草固体培养基包括以下重量份的原料：小麦粉1000份，土豆粉190‑215份、葡糖糖25‑35份、磷酸二氢钾2.1‑3.5份、蛋白陈2.5‑3.6份、硫酸镁0.9‑1.3份、蒸馏水450‑600份；C、将步骤B得到的北冬虫夏草子实体放入破壁机中，加入10‑12倍质量的蒸馏水，粉碎5‑15min，得到北冬虫夏草混合液；D、将步骤C得到的北冬虫夏草混合液，超声波处理40‑50min，在70‑80℃下回流提取3‑4.5h，提取液过滤后浓缩，得到多糖浓缩液；E、在步骤D得到的多糖浓缩液中加入2.8‑3.4倍体积的无水乙醇，搅拌后冷却至4℃，静置18‑36小时，进行离心处理，并将沉淀烘干得到北冬虫夏草多糖提取物；F、步骤E得到的北冬虫夏草多糖提取物加蒸馏水溶解，调节pH值至8‑9，滴加双氧水溶液至无色，50‑60℃保温2‑3h，得到北冬虫夏草多糖提取物无色溶液；G、将步骤F得到的北冬虫夏草多糖提取物无色溶液与木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液混合，两者的体积比为1：(0.45‑0.6)，60‑65℃酶解1‑2h；在酶解液中加入20％体积的Sevage试剂，振荡培养0.5‑1h，然后多次离心直至无蛋白沉淀析出为止，取上清液，烘干，得到北冬虫夏草粗多糖；H、将步骤G得到的北冬虫夏草粗多糖用蒸馏水溶解后上DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析柱，用氯化钠溶液进行梯度洗脱，得到北冬虫夏草多糖。