[发明专利]一种从菠萝中提取神经酰胺的方法及应用

摘要

本发明公开了一种从菠萝中提取神经酰胺的方法及应用，涉及生物活性物质制备与应用技术领域。该提取方法选取未成熟菠萝的菠萝叶与菠萝皮，设计出菠萝挑选与预处理、冷冻干燥、粉碎、提取、浓缩、萃取、分离、柱层析分离、梯度洗脱、重结晶的工艺路线，工艺设计合理，使用的溶剂毒性小，无苛刻条件，可得到高纯度的N‑酯酰基鞘氨醇类物质，结合NMR、MS、HPLC检测，检测结果显示该N‑酯酰基鞘氨醇类物质为1‑O‑β‑D‑葡萄糖‑N‑正二十二碳酰基‑正十六碳‑4,10(E，E)‑二烯鞘氨醇苷，纯度达到98.7％，收率从现有技术中的0.0004％提高到0.13％，适合大规模工艺化生产。

主权项

1.一种从菠萝中提取神经酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、菠萝挑选与预处理：选取生长一年两个月以上、未成熟的菠萝，剥下菠萝叶，削下1‑2mm厚的表层菠萝皮，收集菠萝叶与菠萝皮，剪切成长3‑5cm长条状，使用6‑8wt％的碳酸钠溶液浸润20‑30min，取出后放入盛装有纯化水的超声波清洗器中，超声5‑8min后，取出，静置沥干水分；S2、冷冻干燥、粉碎：沥干水分后的菠萝叶、菠萝皮送入蒸汽回转干燥机中，通入70±5℃的热蒸汽，作用时间为40‑60s，保证物料的中心温度在30±5℃之间，冷却至室温；然后送入真空冷冻干燥机中，在‑15℃～‑10℃冷冻干燥1‑2h；投入粉碎机预粉碎成颗粒状，过20‑40目筛，去除细小粉末，筛余物放入冷冻料桶中，‑5℃冷冻10min，超微粉碎得到粒径8‑12μm的叶皮混合细粉；S3、提取、浓缩：叶皮混合细粉加入到多功能提取罐内，加入6倍量70％乙醇，回流提取1‑2h，再加入4倍量85％乙醇，回流提取40‑60min；提取液使用真空吸入单效外循环浓缩罐内，减压浓缩除去乙醇得到浓缩浸膏；S4、萃取、分离：向浓缩浸膏中加入6‑8倍量的纯化水，分四次萃取，先加入6倍量石油醚，离心分离40‑50s，萃取，放出一次水相；一次水相加入浓缩浸膏4倍量的正己烷，离心分离30‑40s，萃取，放出二次水相；二次水相加入浓缩浸膏2倍量的环己烷，离心分离20‑30s，萃取，放出三次水相；三次水相中加入浓缩浸膏8‑10倍量的乙酸乙酯，搅拌30‑50min后萃取，静置分层后取出乙酸乙酯层，重复萃取2‑3次，合并萃取液，减压浓缩得到焦油状脂类混合物；S5、柱层析分离：将脂类混合物溶解于二氯甲烷溶剂中，使用葡萄糖凝胶柱Sephadex LH‑20层析处理，合并洗脱液、减压浓缩得到神经酰胺粗品；S6、梯度洗脱：使用极性逐渐增大的乙酸乙酯/石油醚混合溶液进行梯度洗脱，通过神经酰胺苯甲酰化UV法检测洗脱液，合并洗脱液、浓缩得到神经酰胺精品；S7、重结晶：神经酰胺精品溶解于DMF/环己烷混合溶液中，重结晶、真空干燥得到神经酰胺纯品。