[发明专利]一种禽多杀性巴氏杆菌病油乳剂灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明属于灭活疫苗的制备领域，具体涉及一种禽多杀性巴氏杆菌病油乳剂灭活疫苗的制备方法。该制备方法包括以下步骤：1）二级种子液制备；2）菌液培养：将二级种子液在灭菌的培养罐中通气培养，控制培养条件，得到菌液，用离心机、中空纤维超滤器或切向流超滤浓缩系统进行菌液清洗浓缩，再用PBS制成悬液，灭活处理，得到抗原液；3）油乳剂灭活疫苗的制备：将白油、司本‑80和硬脂酸铝混合，并经灭菌后制得油相；将吐温‑80和抗原液混合制得水相；将油相和水相进行乳化，并加入硫柳汞溶液，得到油乳剂灭活疫苗。本发明的制备方法成本低，得到的抗原成分均一，乳化效果好。

主权项

1.一种禽多杀性巴氏杆菌病油乳剂灭活疫苗的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：1）二级种子液制备：将菌种划线接种于改良马丁琼脂平板上，选8~12个典型菌落，混合于少量马丁肉汤中，接种斜面培养基若干支，置36~37℃培养18~24小时，作为一级种子；取所述一级种子接种于含0.1%裂解血球全血的马丁肉汤中，置36~37℃通气培养10~12小时，得到二级种子液；2）菌液培养：在发酵罐中装入发酵培养基和消泡剂，灭菌后，按培养基量加入0.1%裂解血球全血，调pH值为7.2，温度为37℃，通气量控制为100L/h，转速控制为100r/min，且在通气量为600L/h、转速为200r/min时校正溶氧值为100%，此时，将所述二级种子液以1%~2%的比例接种于发酵培养基中，发酵过程中，通过补酸补碱控制pH值为7.2~7.4，根据溶氧值调节通气量和转速，通气量的调整范围为100~600L/h，转速的调整范围为100~200r/min，发酵6小时后开始补料，补的料为4倍浓缩的发酵培养基，当溶氧值降到20%以下稳定后突然升高时开始补料，且每次补料不超过100mL，在36~37℃培养10~12小时，得到菌液，用离心机、中空纤维超滤器或切向流超滤浓缩系统进行菌液清洗浓缩，再用pH值为7.2的PBS制成悬液，灭活处理，得到抗原液；3）油乳剂灭活疫苗的制备：将白油、司本‑80和硬脂酸铝混合，并经灭菌后制得油相；将吐温‑80和所述抗原液混合制得水相；将所述油相和水相按照1∶1~3∶1的体积配比进行乳化，并加入硫柳汞溶液，得到所述油乳剂灭活疫苗。