[发明专利]一种同时检测葛根中11种黄酮类成分的方法

摘要

一种同时检测葛根中11种黄酮类成分的方法，属于药物分析技术领域。采用超高液相色谱‑质谱联用法(HPLC‑MS)建立葛根的多指标含量测定方法，同时测定葛根素、3'‑羟基葛根素、3'‑甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黄素、异甘草素、鹰嘴豆芽素A 11种黄酮类成分的含量，以弥补现有技术的不足，促进对葛根黄酮类物质成分的了解及其含量测定，为其广泛应用提供科学依据。

主权项

1.一种同时检测葛根中11种黄酮类成分的方法，其特征在于，同时检测葛根中葛根素、3'‑羟基葛根素、3'‑甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黄素、异甘草素、鹰嘴豆芽素A的方法，它包括如下操作步骤：(1)取葛根样品干燥粉末，以质量百分比浓度为30％乙醇(分析纯)超声提取45min，于室温下放冷，7500r/m离心5min，取上清，每0.5g葛根样品干燥粉末对应50ml 30％乙醇，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液用质量百分比浓度为10％甲醇(色谱纯)稀释1000倍，为制备供试品溶液；(2)选择葛根素、3'‑羟基葛根素、3'‑甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黄素、异甘草素、鹰嘴豆芽素A为对照品，制备对照品混合溶液；准确称定11种对照品适量，用甲醇溶解后，加入10％甲醇定量稀释，制成每1mL分别含葛根素22.93μg、3'‑羟基葛根素35ug、3'‑甲氧基葛根素6.47ug、大豆苷236ug、大豆苷元10ug、染料木素9ug、染料木苷332.22ug、刺芒柄花苷450ug、刺芒柄花黄素4.73ug、异甘草素8.53ug、鹰嘴豆芽素A9.8ug的溶液作为对照品混合储备液。保存于4℃冰箱中，备用；取对照品混合储备液适量，用10％甲醇逐级稀释，并定量稀释制成每1mL分别含葛根素229.3ng、3'‑羟基葛根素350ng、3'‑甲氧基葛根素64.7ng、大豆苷2360ng、大豆苷元100ng、染料木素90ng、染料木苷3322.2ng、刺芒柄花苷4500ng、刺芒柄花黄素47.3ng、异甘草素85.3ng、鹰嘴豆芽素A 98ng的溶液；保存于4℃冰箱中，备用；取对照品储备液适量，加10％甲醇逐级稀释，得到对照品混合溶液；(3)将稀释的对照品混合溶液在超高效液相色谱‑质谱仪中进行进样分析，得到关于11种物质专属性‑样品图谱，分别将逐级稀释的对照品混合溶液在相同色谱和质谱条件下的超高效液相色谱‑质谱仪中进行进样分析，得到11种物质检测值和浓度的线性关系；(4)将步骤(1)制备的供试品溶液采用与步骤(3)相同的色谱和质谱条件下的超高效液相色谱‑质谱仪中进行进样分析，根据步骤(3)中的专属性‑样品图谱、检测值和浓度的线性关系，得到11种物质的浓度，进一步计算含量；检测葛根中上述11种成分，仪器条件如下：色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 2.5μm(2.1×100mm)；流速：0.2mL·min‑1；柱温：40℃；进样量：10L；流动相：A：甲醇；B：0.1wt％甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0min：10％A，6min：90％A，8min：90％A，9min：10％A，10min：10％A；质谱条件：离子源：电喷雾离子化源(ESI源)；离子极性：正离子(Positive)；扫描方式：全扫描；扫描范围(m/z)：100‑800；分辨率：70000；鞘气流速：35arb；辅助气流速：10arb；吹扫气流速：0arb；电离电压：4KV(+)；离子传输管温度：350℃；辅助气加热温度：250℃；AGC target：1e6；最大注入时间：50ms。