[发明专利]一种适于双向电泳的水稻叶片质膜磷酸化蛋白的提取方法

摘要

本发明属于蛋白质组学技术领域，具体首次公开了一种适于双向电泳的水稻叶片质膜磷酸化蛋白的提取方法，包括水稻叶片粗质膜的提取、水稻叶片质膜的纯化及水稻叶片质膜磷酸化蛋白质的富集等步骤。本发明所述提取方法操作简单、提取效率高、成本低，所获的水稻叶片质膜纯度可达93%以上，从质膜蛋白质中富集的质膜磷酸化蛋白质得率为3.33～3.89%。该方法适合于质膜磷酸化蛋白提取困难、干扰杂质多的植物材料；同时所得质膜磷酸化蛋白杂质和干扰物较少，可满足双向电泳的要求，所获双向电泳图谱背景清晰、蛋白质点分布均匀、纵向拖尾和水平横纹现象较少，且具有良好的重复性；该方法适用于单子叶植物质膜磷酸化蛋白质组的制备与分析。

主权项

1. 一种水稻叶片粗质膜的提取缓冲液，其特征在于，包含以下组分：终浓度50 mmol/L的BTP‑MES缓冲液，终浓度250～500 mmol/L的蔗糖，终浓度0.5～10 mmol/L的EDTA，10～20% v/v甘油，0.1～1% w/v BSA，终浓度1～10 mmol/L的PMSF，终浓度0.1～2 mmol/L的DTT，0.6～5% w/v PVP k‑30，终浓度10～50 mmol/L的NaF，终浓度5～15 mmol/L的β‑巯基乙醇，终浓度1～2 mmol/L的NaMoO4·2H2O，终浓度0.05～2 mmol/L的NaVO3，终浓度2.5～10 mmol/L的焦磷酸钠，0.01～0.02% w/v Brij 56；所述水稻叶片粗质膜提取缓冲液的pH值为7.6～7.8。