[发明专利]ddx27基因缺失斑马鱼突变体的制备方法有效
| 申请号： | 201810525964.6 | 申请日： | 2018-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN108753834B | 公开（公告）日： | 2021-11-23 |
| 发明（设计）人： | 张庆华;时灿;岳倩文;祖尧;李伟明 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/113;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中，培养获得稳定遗传的ddx27基因突变体。另外，本发明还公开了ddx27基因缺失斑马鱼突变体的表型，对于研究其生物学功能有重要作用。 | ||
| 搜索关键词： | ddx27 基因 缺失 斑马 突变体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种斑马鱼ddx27基因缺失突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、确定ddx27基因敲除的靶点在斑马鱼ddx27基因第6个外显子上设计gRNA序列；S2、设计合成gRNA的上游引物T7‑ddx27‑sfd、下游引物tracr rev；S3、以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx27‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；S4、对步骤S3的PCR产物进行体外转录，转化获得gRNA；S5、将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中；S6、培养获得稳定遗传的斑马鱼ddx27基因突变体。
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