[发明专利]核酸适配体的筛选方法及特异性结合铜绿假单胞菌的核酸适配体有效
| 申请号： | 201810512936.0 | 申请日： | 2018-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN108753789B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 刘晨光;池哲;王洪英;于钰;丁松;李生慧 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学;青岛优度生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12Q1/6825;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 温可睿;赵青朵 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： |
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及核酸适配体的筛选方法及特异性结合铜绿假单胞菌的核酸适配体。本发明提供的适配体具有良好的特异性和灵敏度，以该适配体制备的生物传感器能够实现对铜绿假单胞菌菌的准确检测，检测范围从10 |
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| 搜索关键词： | 核酸 适配体 筛选 方法 特异性 结合 铜绿 假单胞菌 | ||
【主权项】：
1.特异性结合铜绿假单胞菌的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括：构建随机文库，SEQ ID NO:3～4所示核苷酸序列的引物对制备次级文库；以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄杆菌为反筛选菌株，以铜绿假单胞菌为正筛选菌株，交替进行正筛选、反筛选共计15次；筛选获得的ssDNA文库经测序后，选择丰度较高，而自由能与Kd值皆较低者，以恶臭假单胞菌、粪肠球菌、产气荚膜梭状芽胞杆菌为目标，排除特异性较低的适配体，筛选获得特异性结合铜绿假单胞菌的核酸适配体；所述随机文库由顺序连接的5’端固定区域、随机区域、3’端固定区域组成；所述5’端固定区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述3’端固定区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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