[发明专利]基于血管基膜结构在心血管植入材料表面仿生构建多功能修饰层的方法

摘要

本发明公开了一种基于血管基膜结构在心血管植入材料表面仿生构建多功能修饰层的方法，首先在材料表面制备HA条纹状微图形，并在该表面对血管平滑肌细胞/内皮细胞依次进行培养‑剥离模式的操作，通过这种方法可获得收缩型平滑肌细胞的细胞外基质和仿血流剪切力作用下的内皮细胞外基质复合构成的仿血管基膜结构的修饰层，该仿生修饰层具有抗凝血、促内皮化、抑制巨噬细胞粘附等多重功能。本发明在心血管植入材料表面构建具有抗凝血，再内皮化，以及抑制巨噬细胞粘附特性的多功能仿血管基膜结构修饰层，显著改善了材料的血液相容性和促进内皮化能力。

主权项

1.一种基于血管基膜结构在心血管植入材料表面仿生构建多功能修饰层的方法，其特征在于它包括以下步骤：A、在材料表面制备分子量为4×103‑1×107 DA的透明质酸条纹状微图形，透明质酸为HA；透明质酸条纹状微图形中HA的宽度为100nm‑100μm，裸露材料条纹宽度为100nm‑100μm，待用；B、材料表面图案化血管平滑肌细胞外基质的制备：将传代2‑5代的血管平滑肌细胞以1×103‑1×106个/ml的密度种植于步骤A所述透明质酸条纹状微图形表面，在37℃，体积百分比浓度5% CO2的标准培养条件下培养1‑15天，该步骤得到经HA微图形调控后，形状拉长、排布有序的收缩型平滑肌细胞；吸除用过的细胞培养液，培养细胞的样品用37℃的PBS清洗1‑5遍后，加入脱细胞液，在37℃，体积百分比浓度5% CO2的标准培养条件下脱细胞处理10‑120分钟，取出后吸除脱细胞液，用37℃的PBS再次清洗1‑5遍，37℃干燥后即得图案化血管平滑肌细胞外基质；C、材料表面双层图案化血管平滑肌/内皮细胞外基质的制备：将传代2‑5代的血管内皮细胞以1×103‑1×106个/ml的密度种植于步骤B所述图案化血管平滑肌细胞外基质表面，在37℃，体积百分比浓度5% CO2的标准培养条件下培养1‑15天，该步骤得到经HA微图形调控后，形状拉长、排布有序的血管内皮细胞；吸除用过的细胞培养液，培养细胞的样品用37℃的PBS清洗1‑5遍后，加入脱细胞液，在37℃，体积百分比浓度5% CO2的标准培养条件下脱细胞处理10‑120分钟，取出后吸除脱细胞液，用37℃的PBS再次清洗1‑5遍，37℃干燥后即得目标物，步骤A、步骤B和步骤C均在无菌条件下完成。