[发明专利]毕赤酵母表达长效猪源干扰素的方法

摘要

本发明公开了一种制备猪源长效干扰素λ3的方法和应用，属于基因工程产品制备领域。包括编码猪源长效干扰素λ3基因的克隆，含猪源干扰素λ3基因和长效元件用不同Linker连接的真核表达载体的构建，用所述含不同Linker的猪源干扰素长效λ3基因的重组真核表达载体转化GS115，PCR扩增筛选阳性克隆子。所述制备的猪源长效干扰素λ3具有更长的半衰期，较报道的普通干扰素λ3半衰期（4 h以内）提高10倍以上。

主权项

1.一种在毕赤酵母GS115中表达猪源长效ABD‑FL‑IFNλ3的方法，具体步骤如下： 1）以合成的猪λ3干扰素基因及长效元件ABD为模板，分别用引物λ3‑FL‑F，λ3‑R，ABD‑F， ABD‑FL‑R扩增含 FL Linker的目的片段； 2）利用引物 ABD‑F和λ3‑R 通过PCR技术扩增全长含FL Linker的猪源ABD‑FL‑IFNλ3基因全长，上游引物ABD‑F；下游引物λ3‑R；3）将猪源ABD‑ IFNλ3 基因用T5克隆法克隆到酵母pPicZαA载体，获得重组载体pPicZαA‑ABD‑FL‑IFNλ3并转化毕赤酵母GS115，筛选重组酵母表达菌；4）对3）中阳性克隆子进行诱导表达；5）纯化，验证FL Linker对长效干扰素表达的影响，进一步制备干扰素样品及活性检测；6）对5）表达样品，在MDBK及VERO细胞水平上评价干扰素活力；7）对5）表达样品采用细胞病变抑制法检测ABD‑IFNλ3在猪体内的半衰期。