[发明专利]一种高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法

摘要

本发明涉及丁酸梭菌发酵工艺技术领域，具体涉及一种高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，包括种子液的制备、一级氧发酵培养、二级发酵培养和吸附烘干；二级发酵过程中补料葡萄糖，全程控温和控pH值，全程低速搅拌发酵培养，排除溶氧风险；本发明的芽孢形成率百分之百，菌液丁酸梭菌菌数高，丁酸梭菌芽孢损失率低，多级发酵更加有利于芽孢对高温的耐受性，菌液菌数达到25‑30亿/ml，提高菌粉在吸附烘干过程中的热损失，提高菌粉中丁酸梭菌活芽孢数1‑1.5倍，菌粉菌数达到4‑5亿/g，提高菌粉中的活芽孢数和丁酸盐含量，提升产品的质量和竞争力，具有显著的经济效益。

主权项

1.一种高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制种子培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.0‑7.2，表面覆盖2‑3cm液体石蜡，121℃、20min灭菌，冷却至室温，接种1％的丁酸梭菌菌液，密封放入培养箱37℃培养24h，80℃水浴保持10min，制得一级种子液培养；(2)种子罐空消操作后，加入种子培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.0‑7.2，表面覆盖2‑3cm液体石蜡，121℃、20min灭菌，冷却至38℃以下，接种1％的一级种子液，37℃培养14‑24h，加热蒸汽夹套，80℃保温10min，制得二级种子液；(3)配制发酵培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.5‑8.0，发酵罐空消操作后，安装pH电极并校准，加入并溶解发酵培养基，121℃、20min灭菌后，向发酵罐内通入高纯氮气后，搅拌并降温至发酵罐内温度低于38℃，密封发酵罐并通过补充氮气保持发酵罐内正压，全程搅拌，开启移种管道阀门，排空移种管道内空气，接种0.5‑2％的二级种子液，37℃发酵18‑24h，加热蒸汽夹套，80℃保温10min，完成一级发酵；(4)使用高纯氮气将步骤(3)的发酵菌液压至空消操作后的二级发酵罐中，30‑37℃控温发酵，控制pH值，当发酵菌液开始产气后，补料葡萄糖，全程搅拌，发酵18‑28h，放罐，结束发酵培养；(5)粗粉碎农作物制得吸附剂，将吸附剂与步骤(4)的发酵菌液混合均匀，干燥后进行细粉碎，制成菌粉，流化床烘干菌粉。