[发明专利]一种高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法

权利要求书

1.一种高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)配制种子培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.0-7.2，表面覆盖2-3cm液体石蜡，121℃、20min灭菌，冷却至室温，接种1％的丁酸梭菌菌液，密封放入培养箱37℃培养24h，80℃水浴保持10min，制得一级种子液培养；

(2)种子罐空消操作后，加入种子培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.0-7.2，表面覆盖2-3cm液体石蜡，121℃、20min灭菌，冷却至38℃以下，接种1％的一级种子液，37℃培养14-24h，加热蒸汽夹套，80℃保温10min，制得二级种子液；

(3)配制发酵培养基，使用氢氧化钠溶液调节pH至7.5-8.0，发酵罐空消操作后，安装pH电极并校准，加入并溶解发酵培养基，121℃、20min灭菌后，向发酵罐内通入高纯氮气后，搅拌并降温至发酵罐内温度低于38℃，密封发酵罐并通过补充氮气保持发酵罐内正压，全程搅拌，开启移种管道阀门，排空移种管道内空气，接种0.5-2％的二级种子液，37℃发酵18-24h，加热蒸汽夹套，80℃保温10min，完成一级发酵；

(4)使用高纯氮气将步骤(3)的发酵菌液压至空消操作后的二级发酵罐中，30-37℃控温发酵，控制pH值，当发酵菌液开始产气后，补料葡萄糖，全程搅拌，发酵18-28h，放罐，结束发酵培养；

(5)粗粉碎农作物制得吸附剂，将吸附剂与步骤(4)的发酵菌液混合均匀，干燥后进行细粉碎，制成菌粉，流化床烘干菌粉。

2.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述氢氧化钠溶液的质量分数是10-20％。

3.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(4)中控制pH值的操作过程是：将碳酸钠溶于蒸馏水中制得质量分数为10-20％的碳酸钠溶液，121℃、20min灭菌，使用高纯氮气排空管道空气，向二级发酵罐中流加碳酸钠溶液，控制二级发酵罐中发酵菌液的pH值为7.0-8.0。

4.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(4)中补料葡萄糖的操作过程是：向空消操作后的种子罐中加入发酵培养基，再加入葡萄糖并溶解，115℃、20min灭菌后制得补料培养基，当二级发酵罐中的发酵菌液开始产气后，高纯氮气排空管道空气，以0.05L/min的流速补充补料培养基至二级发酵罐中，补料时间为10-12h。

5.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(4)中全程搅拌的搅拌速度为100r/min。

6.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述农作物为玉米胚芽粕，所述步骤(4)的发酵菌液与吸附剂的料液比(ml/g)为1:5-6。

7.如权利要求1所述的高产芽孢态丁酸梭菌的多级发酵生产方法，其特征在于，所述流化床的进风温度为50-70℃，所述流化床的出风温度为30-50℃。