[发明专利]一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法，属于临床体外检测技术领域，其基本步骤为首先配置缓冲液，然后加入对氨基苯磺酸和AEO‑9两种物质作为激活剂，然后加入载体PEG20000（sigma），再加入保护剂以及乳化剂和离子物质搅拌均匀后，依次加入胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶，慢中速搅拌10分钟，然后使用低转速离心机离心后，取出上清液即可得到同等效果的PEG修饰酶。配方组成成分：PIEPES、对氨基苯磺酸、AEO‑9、PEG20000、保护剂、乳化剂、离子物质、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、MIT，本方法操作简单、成本低，与PEG修饰酶法检测高密度脂蛋白胆固醇具有良好的兼容性。

主权项

1.一种PEG修饰胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶的制备方法如下：1）基本原理：以PEG20000为载体，在激活剂以及离子物质的存在的情况下，使胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶与PEG20000之间形成离子键，以获取具有对脂蛋白具有选择性的PEG修饰酶；2)基本步骤：首先配置缓冲液，然后加入对氨基苯磺酸和AEO‑9两种物质作为激活剂，然后加入载体PEG20000（sigma），再加入保护剂以及乳化剂和离子物质搅拌均匀后，依次加入胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶，慢中速搅拌10分钟，然后使用低转速离心机离心后，取出上清液即可得到同等效果的PEG修饰酶；3)配方组成成分：PIEPES                                   100mmol/L PH=7.0对氨基苯磺酸                             5mmol/LAEO‑9                                    1.2g/LPEG20000（sigma）                          5G/L保护剂                                   2ml/L‑3ml/L乳化剂                                   1ml/L‑3 ml /L离子物质                                 3g/L‑5g/L胆固醇氧化酶                             3KU/l胆固醇脂酶                               1KU/lMIT                                      0.5g/L‑1g/L。